PCR анализ за диагностициране на туберкулоза

Медицината никога не стои неподвижно и досега напредъкът в сектора на здравеопазването дава възможност за диагностициране и излекуване на много от предишните незасегнати заболявания. Има и болести, които не могат да бъдат открити чрез визуална инспекция. Туберкулозата винаги е била сред тях. Това е опасна инфекциозна болест, която засяга белите дробове, ставите и костите и често води до смърт дори и в наши дни. Диагностичните методи за това заболяване са подобрени, което прави възможно откриването на заболяването на по-ранни етапи, когато е лечимо. Сред тях са не само рентгенови и мантови тестове, но и PCR за туберкулоза.

Туберкулоза - какво е това

Преди това туберкулозата се наричаше сухо заболяване или фтиза. Това е бактериална инфекция, която най-често засяга белите дробове. Неговите екстрапулмонарни форми - туберкулоза на костите и ставите, туберкулозен менингит - са по-чести и по-напреднали. За причинителя на това инфекциозно заболяване са микобактериите. Бацилът на туберкулозата се нарича също и пръчицата на Кох.

Инфекцията с туберкулоза е много заразна, тя се предава от въздушни капчици при кашляне и кихане на пациента. Единствената защита срещу тази болест е навременната доставена ваксина. Той не предпазва от инфекции, но не позволява на бацилите да проникнат в организма, за да причинят туберкулоза.

Форми на туберкулоза

Заболяването може да се прояви както в отворена, така и в затворена форма. Разликите са както следва:

• затворена туберкулоза е асимптоматична. При такива обстоятелства, кочовата палка в храчките е невъзможно да се открие, следователно инфектираният не е опасен за околната среда. Подобен ход на заболяването обикновено не застрашава най-заразените, но има и изключения - в един от десет случая затворената туберкулоза е в състояние да отиде в отворена форма;
• с отворена форма, микобактериите, които причиняват туберкулоза, се откриват в слюнката и храчките на пациента. Заразеният организъм представлява голяма опасност за обществото, дори в изолация. Като правило болестта първо засяга белите дробове. Ако не се диагностицира рано, тя може да приеме други форми, като туберкулоза на костите или ставите.

Отворената форма на туберкулоза се диагностицира по различни начини. Пациентът претърпява рентгенова снимка на гръдния кош или рентгенова снимка на гръдния кош, анализи на биологичния му материал или кожен тест на Манту. Неотдавна се появи друг метод, който се счита за еднакво ефективен - анализът на полимеразната верижна реакция (PCR).

Какво означава PCR?

В медицинската практика отдавна са използвани методи за диагностициране на това или онова заболяване чрез откриване на ДНК или РНК в човешкото тяло. Това е именно PCR за туберкулоза. Това е високо прецизен анализ на кръв или друга биологична течност, която ви позволява да идентифицирате бактерии с минимална концентрация в избрания материал, достатъчно е една клетка. Изследването се провежда с помощта на специален полимеразен ензим.

Предимства на метода

PCR е диагностичен метод, който се проявява от най-добрата страна, така че се използва доста често, както в комбинация с други методи, така и независимо. Неговите предимства:

• най-кратките срокове на производство. Изследването се провежда бързо, след около 5 часа чрез PCR може да се открие наличието на туберкулозен бацил в биологичната течност на пациента. Това е особено вярно, ако трябва да извършите незабавна хирургична интервенция и преди това да получите точна диагноза;
• Случва се, че други диагностични методи са противопоказани на пациента. Например рентгеновите лъчи не могат да се правят в никакъв случай. Освен това картината не винаги е възможно да се постави диагноза, особено ако заболяването е на ранен етап. С помощта на PCR метода, патогенът се открива незабавно;
• Биологичната течност на всеки пациент е подходяща за анализ. PCR на урината и слюнката за туберкулоза се извършва за идентифициране на белодробни и екстрапулмонални форми. Изследването се провежда и с помощта на гръбначномозъчната течност на пациента за откриване на туберкулозен менингит.
• Методът е абсолютно безопасен. За да го проведе, е достатъчно да се получи биологична течност от пациента. PCR диагностиката на туберкулозата при деца е удобна и безвредна, тъй като рентгеновото изследване е разрешено само на 18-годишна възраст, а тестът на Манту понякога причинява нежелани реакции;
• PCR е високо чувствителен анализ. Позволява ви да идентифицирате коковите пръчки с минимална концентрация на микобактерии;
• С помощта на специален полимеразен ензим, болестта се диагностицира на всеки етап, от ранна до напреднала;
• този метод е ефективен при диагностициране на рецидив на заболяването;
• Този метод е пробив в правенето на точни диагнози в ранните стадии на заболяването. Това ви позволява да започнете лечение в най-кратки срокове и да унищожите патогените, когато те все още не са имали необратимо отрицателно въздействие върху органите и системите на човешкото тяло.

Къде да се направи PCR анализ за туберкулоза

Въпреки че PCR анализът за туберкулоза е високо ефективен метод за диагностициране на това заболяване, той рядко се използва самостоятелно. По правило това е допълнителен метод за откриване на туберкулоза и се използва рядко. Факт е, че този метод е доста скъп.

Обществените клиники нямат възможност да закупят специално оборудване за извършване на PCR анализ, а правителството не вижда смисъл в финансирането на тази статия, тъй като туберкулозата може да бъде диагностицирана по други начини. Такова проучване най-често се извършва в частни клиники, които могат да си позволят закупуване на необходимото оборудване.

Недостатъци на метода

Високата цена не е единственият недостатък на PCR. В допълнение към високата цена, методът има и други недостатъци и недостатъци, например:

• PCR за туберкулоза дава положителен резултат дори след лечение, тъй като отнема мъртвите клетки като живи бактерии, следователно този метод не е подходящ като контролен преглед на пациента, за да потвърди възстановяването му;
• туберкулозните бацили мутират и тяхната ДНК се модифицира, което може да повлияе на надеждността на резултата;
• РЛР кръвни тестове за туберкулоза рядко се извършват, тъй като присъствието на пръчки Koch в тези биологични течности е изключително трудно за откриване. Това е възможно само в последните етапи или при сепсис. Обикновено храчките на пациента се вземат за диагностика;

Заслужава да се отбележи, че най-точният резултат е именно събирането на съдържанието на стомаха на пациента. Ако се подозира белодробна туберкулоза, културата на храчки ще бъде най-ефективният начин за диагностициране на заболяването. Ако пациентът има екстрапулмонална форма, тогава може да няма бактерии в тази биологична среда. За да се определи туберкулозата на костите, ставите и т.н. с помощта на PCR, е необходима друга биологична течност, например спинална течност.

Как е PCR за туберкулоза

Както е описано по-рано, същността на PCR анализа е да се открие ДНК на патогена в биологичната течност на пациента чрез полимеразната реакция. Основните етапи на метода:

1. Вземане на проби от биологичен материал. PCR не е само хемотест - изследваната биомаса може да бъде слюнка, урина, цереброспинална течност, бронхиална промивна течност, стомашно съдържание, храчки.
2. След това биомасата е изложена на високи температури, за да унищожи ДНК структурата на патогена.
3. След това температурата постепенно намалява и праймерът се прикрепя към унищожения ДНК елемент.
4. Според резултатите от молекулярния синтез, който отнема около 30 цикъла, се открива щамът на дадена патогенна бактерия или неговото отсъствие.

Този анализ изисква добро финансиране, така че PCR не се извършва много често. Въпреки това, този метод няма равни, когато други диагностични опции са забранени, или в случай на извънредна ситуация, когато няма време да се изчака резултатът.

Обобщава

В заключение можем да направим следните заключения:

• PCR е високо точен анализ, който може да открие туберкулоза няколко дни след инфекцията;
• този анализ се извършва за 3.5 - 5 часа, така че в случаите, когато сметката върви към часовника, тя е незаменима;
• това е безопасен метод, който няма странични ефекти;
• Използва се, когато други диагностични методи са показали противоречиви резултати или употребата им е противопоказана.

Въпреки това, PCR рядко се прави, тъй като това е скъп анализ, който изисква инсталирането на специално оборудване. Освен това той не винаги е информативен, така че експертите използват този метод за откриване на туберкулоза като допълнителен.

Предимства и недостатъци на PCR (a) за диагностициране на туберкулоза

Специфична туберкулозна инфекция е налице в човешките тъкани и структури в продължение на много години и при определени обстоятелства се разпространява бързо в тялото за 2-3 месеца. Понякога най-добрият курс на лечение е много труден за избор поради късната диагностика и адаптация на патогена към много лекарства.

Последната PCR диагноза за туберкулоза помага за откриване не само на развитото заболяване, но и на самия патоген, когато първите признаци на заболяването все още не са се появили.

Какво е PCR?

Наскоро се появи диагноза туберкулоза чрез PCR. През 1983 г. микробиолог от Америка, Кери Мълис, изобретява процедура, чрез която микроорганизмите могат да бъдат реконструирани от биологичен материал в кратък сегмент. Тази работа е спечелила Нобелова награда.

PCR за туберкулоза е процес на полимерна верига, при който диагностицирането и откриването на вирусни патогени чрез генно инженерство. Техниката се използва в имунологични, микробиологични, вирусологични и биохимични лаборатории.

Универсалният метод помага на лекарите да диагностицират и идентифицират инфекциозен процес дори след първите часове на инфекцията, много преди началото на симптомите. Изследването е възможно дори и с малко количество биоматериал.

Какво е необходимо за анализ?

• Няколко сегмента от ДНК (праймери), с които започва биологичният синтез;
• Нуклеотидни съединения, основа на ДНК молекулата или РНК;
• Полимеразен ензим, който ускорява PCR анализа.

Каква е основата на метода?

Първо, сегмент от ДНК се извлича от биоматериал от инфектиран човек, като се използват методите на генно-молекулярната биосинтеза, като се определя типът на микроорганизмите, към които принадлежи биофрагмата.

Тази сложна реакция отнема по-малко време от някои биометоди. PCR определя патогена за няколко часа, докато не е необходимо да се изолира от биологична течност (слюнка, цереброспинална или кръвна среда), не е необходимо да се отглежда за дълго време върху хранителна среда. Достатъчно е, че изследваният материал съдържа ДНК нишка на инфекциозен патоген.

При провеждане на PCR кръвен тест за туберкулоза in vitro, синтезирането на рибонуклеинови киселини на микобактерията туберкулоза се създава изкуствено.

Етапи на диагностика

Молекулната реакция чрез PCR е проста процедура, която отнема малко време. Изисква се необходимия биоматериал: за определяне на tbc се използва кръв, слюнка, бронхиална промивна течност.

1. Първо, първичната форма на ДНК се разрушава, 2 вериги се разделят при висока температура (максимум 98 ° С за не повече от 2 минути);
2. След това се извършва отгряване, първичната температура се намалява с няколко деления, ДНК веригата се свързва с праймера;
3. Следващият етап се нарича удължение, с биосинтеза на необходимите молекулярни структури.

За да се получи необходимия брой копия на ДНК, трябва да преминат от 25 до 30 такива цикъла и полученият брой микобактерии се разпознава лесно.

Необходимо ли е да се прави PCR за туберкулоза?

Директно за всички пациенти със съмнение за ТВС, диагностиката на веригата не се извършва, тъй като процедурата изисква използването на скъпо оборудване. Не всички медицински институции дават възможност да бъдат закупени, особено след като обичайните методи за диагностициране на микобактерията туберкулоза също са информативни.

• Внимателно вземане на анамнеза, разпитване на пациента;
• Външен преглед;
• Mantoux туберкулинов тест;
• Радиографско или флуорографско изследване;
• Ако е необходимо, компютърна диагностика;
• Микроскопско или бактериологично изследване на маската с храчки.

PCR за туберкулоза се извършва само когато не е възможно да се извърши друг инструментален анализ или при обстоятелства, които са трудни за диагностициране.

Въпреки че са измислени множество диагностични методи, броят на пациентите с туберкулоза продължава да нараства. В допълнение, честотата е придобила някои характеристики: често се наблюдава тежка форма на заболяването, броят на смъртните случаи се увеличава, патогенът става резистентен към съществуващите химиотерапевтични лекарства.

Много хора не искат да се подлагат на рутинна инспекция всяка година, отказват се ваксинации, което води до увеличаване на честотата. Такива обстоятелства изискват ефективни и информативни изследователски методи, достъпни за възрастни и деца, диагностицирани с tbc. PCR има предимства пред другите диагностични методи.

Каква е стойността на метода?

Това последно изследване се е доказало добре. Ако поради редица причини е трудно да се постави диагноза или, в някои спорни случаи, PCR открива бацила на туберкула по-лесно в биологичен материал, отколкото други методи.

• Това бързо проучване, малък сегмент от молекулата прави възможно да се направи точна диагноза за кратко време за около 5 часа, това се използва в спешни случаи, например, преди спешна хирургична интервенция;
• Анализ на кръвта за туберкулоза е възможен, когато други методи са недостъпни или противопоказани - понякога за откриване на патогена на tbc, трябва да се вземат много Rg-изстрели, а радиационната доза е твърде голяма;
• Използвайки полимеразната реакция, всички биологични течности могат да бъдат изследвани за наличието на микобактерии. Например, можете да проведете изследване на гръбначно-мозъчната течност с туберкулозен менингит или урина с урогенитална туберкулоза;
• Методът е безопасен, диагнозата туберкулоза при деца, използващи PCR, не предизвиква затруднения;
• Методът на полимерната реакция разкрива туберкулозен бацил във всякакви форми и стадии на заболяването;
• Наличието само на няколко бактерии в биоматериала ви позволява да видите присъствието на микроорганизми, тъй като това е чувствителна реакция;
• PCR лесно диагностицира рецидивите на заболяването.

Въпреки огромния брой предимства, всички пациенти с подозрение за tbc проучване не се извършва, тъй като има и недостатъци, те също се вземат предвид.

видео

Видео - ранна диагностика

Какви са недостатъците?

Този метод на диагностициране е по-скоро изключителен, отколкото естествен, поради което има причини. На първо място, високата цена на метода е взета предвид. Оборудването е скъпо, обществените клиники нямат възможност да я закупят поради високата цена, но повечето от платените лаборатории разполагат с оборудването, те се анализират.

• Методът открива мъртви бактерии, които са починали след лечението, докато PCR показва положителен резултат. Веднага след химиотерапията няма смисъл да се провежда изследване, тъй като резултатът ще бъде ненадежден;
• Мутациите на Mycobacterium tuberculosis са чувствителни, което води до неефективност на метода и ДНК веригата не може да бъде синтезирана последователно.

Околната среда за изследването трябва да бъде внимателно подбрана, кръв или урина може да се събере само ако има съмнение за инфекция. Sputum не трябва да се приема за изследване, ако се подозира костна туберкулоза. В тази ситуация диагнозата ще бъде неправилна.

Рядко се взема кръв и урина на пациент с туберкулоза, които трябва да бъдат изследвани при PCR, като идентифицирането на болестта по този начин е под въпрос. В тези биологични среди патогенът се определя само при сепсис или в случай на дисеминирана туберкулоза. Местните форми са най-чести, като кръвта и урината им могат да останат непроменени. Най-често храчките се вземат за изследване.

Кой показва анализа?

Повечето пациенти са изпратени за PCR диагностика при спорни и трудни случаи на туберкулоза. Кога медицинските специалисти издават реферали за изследвания?

1. Ако има контакт с човек, който е бил диагностициран надеждно с туберкулоза, но е трудно да се диагностицира с конвенционални методи;
2. При тези обстоятелства, ако пациентът да предостави на клиниката е невъзможно за радиография или други изследвания. В такава ситуация е по-лесно да се инспектира с помощта на полимерния метод. Анализът на слюнка се доставя просто в лабораторията в специален контейнер и резултатът става известен след няколко часа;
3. Преди операцията е необходимо спешно да се определи дали пациентът е болен от туберкулоза, в който случай е показана PCR;
4. Поради безопасността на метода е възможно да се извърши изследване на бременна жена или дете, без да се създава допълнително рентгеново натоварване;
5. Съмнителни резултати от теста на Манту.

Всеки, който иска, може да бъде прегледан срещу заплащане, ако туберкулозата не е потвърдена с помощта на бактериология и флуороскопия. Това се случва, ако лезията в белодробната тъкан е невидима в Rg-образа в директна проекция и пациентът не е в състояние да събере правилно слюнката, но признаците на човешка туберкулоза са нарушени.

Съвременната PCR реакция за диагностициране е ключът към успешното лечение, в резултат на което разпространението на заболяването намалява. Традиционните методи за идентифициране на заболявания не винаги дават желания ефект.

Така PCR анализът досега е станал един от надеждните и безопасни методи за диагностика в ранните стадии на заболяването.

Има противопоказания за теста Манту? Ще се направи PCR анализ за туберкулоза.

Туберкулозата е опасна болест, която може да бъде лекувана с навременна диагноза.

Едно от най-информативните проучвания за идентифициране на заболяването на ранен етап се нарича метод PCR (полимеразна верижна реакция).

PCR анализът е не само най-информативното, но и едно от най-достъпните изследвания, които могат да открият туберкулозата в ранните му стадии.

Какво е PCR анализ?

Всички живи микроорганизми, включително вируси и бактерии, съдържат в структурата си РНК и ДНК молекули. Чрез подчертаване на тези киселини е възможно да се каже с голяма сигурност кои чужди агенти присъстват в човешката кръв и да направят точна диагноза.

Същността на метода PCR е специалната обработка на проби от биологични течности, в резултат на което е възможно да се определи към кои видове принадлежат микроорганизмите, които присъстват в него.

Анализ на PCR за туберкулоза: индикации, предимства и недостатъци

PCR техниката се използва при хора с тежки белодробни лезии в тези случаи и дихателни прояви (тежка кашлица, хемоптиза), когато е невъзможно да се диагностицира точно с клинични симптоми.

Препоръчва се изследването и след пряк контакт с носителя на заболяването. Предимствата, които той има, включват:

• скорост на изпълнение - за да се получи резултат, не е необходимо да отглеждате култура на патогена или да извършвате други сложни процедури;
• силно информативен - при диагностициране на туберкулоза точността на анализа достига 90% и по-висока;
• висока чувствителност и специфичност - за идентифициране на патогени в материала може да съдържа само една клетка на вируса;
• универсалност - практически всякакви биологични течности са подходящи за анализ: слюнка, кръв, бронхиални лави.

За сравнение: точността на микроскопията на мазките на храчките, която се използва за откриване на туберкулоза, е само 40-50%, а с малък брой патогени се намалява до 10% или по-малко. Културата на храчката е по-информативна, но отнема от 2 до 8 седмици за постигане на резултати.

Можете да използвате PCR за туберкулоза вместо Манту, ако лицето има някакви противопоказания към пробата.

Недостатъците на техниката включват риска от получаване на фалшиво-отрицателен резултат. С други думи, липсата на специфична ДНК в храчки, кръв или урина все още не показва липсата на туберкулоза при пациент.

Важно е. При диагностицирането на туберкулоза при децата чувствителността на PCR анализа е по-ниска, отколкото при възрастни и е около 25-83%.

Снимка 1. Правенето на PCR вместо дете от Манту е добър вариант, ако той е алергичен или често болен.

Процедурата за анализ на PCR

Процедурата за провеждане на PCR анализ се извършва с помощта на специално устройство, наречено амплификатор, и се състои от четири етапа. За изследването са необходими ДНК секции, от които започва синтеза на молекули, нуклеотиди (бази на ДНК молекули), както и полимераза, или ензим, който ускорява процедурата.

1. Събиране на биологичен материал (храчка, кръв, бронхиален лаваж).
2. Пробата се загрява до температура от около 98%, за да се разруши първичната структура на ДНК веригата.
3. Отгряването или понижаването на температурата с няколко градуса, за да се свърже праймера с ДНК веригата.
4. Синтез на молекули, необходими за получаване на резултат.

След провеждането на 25-30 такива цикъла се образува определен брой копия от ДНК на вирусите, с които е лесно да се определи причинителят на заболяването.

Внимание: PCR анализът не различава "мъртвите" микроорганизми от "живите", следователно резултатът може да бъде положителен за определено време след лечението.

Подготовка за анализ

Ако се вземе PCR кръвен тест за туберкулоза, няма нужда от специално обучение, но на пациентите се препоръчва да следват общите правила: да се въздържат от ядене в продължение на поне 8 часа, да се елиминира алкохолът и да се приемат медикаменти, да не се пуши за час преди да се вземе материала.

Смутката се събира сутрин след измиване и цялостно изплакване на устата.

Ако ексудатът се екскретира слабо, трябва да вземете отхрачващо средство през нощта преди или да вземете инхалация. Слюнката с мукус, гной, бели или жълтеникави петна има диагностична стойност.

Ако не е възможно да се вземе слюнка за анализ, за ​​идентифициране на патогени се използват тампони на бронхио. Такъв анализ не изисква подготовка и материалът се взема, както следва. С помощта на ларингеална спринцовка, пациентът се излива в трахеята разтвор на натриев хлорид, който причинява силна кашлица - за изследване се използва кашлица.

Предупреждение. Резултатът от анализа изкривява антибиотици, хепарин и други лекарства, използвани за локално лечение, така че проучването се препоръчва 10-14 дни след приложението.

PCR анализ (диагностика) на туберкулоза

Туберкулоза или консумация - една от най-популярните инфекциозни заболявания на 21-ви век. Нейните патогени са специални микробактерии - кочови пръчки.

Заболяването се разпространява не само в белите дробове, но и в мозъка, храносмилането, ставите или гръбначния стълб, пикочната система и кожата.

Според СЗО 10 милиона души страдат от туберкулоза всяка година, от които 3 милиона са фатални.

Ситуацията е особено тъжна на територията на страните от ОНД, тук туберкулозната епидемия се среща периодично. Русия, Казахстан, Украйна се ръководят от тъжен рейтинг за разпространението на тази инфекция.

Инфекцията лесно се предава чрез въздушни капчици или чрез храносмилателната система, засяга жизненоважни органи и също така е в състояние бързо да се адаптира към полимерни лекарства и химиотерапия.

Един от основните фактори за успешното лечение на туберкулозата е своевременното откриване на инфекцията.

Диагностични методи

Човечеството е изобретил много методи за разпознаване на опасна болест. Диагностиката на туберкулозата е разделена на инструментална и лабораторна.

В първия случай, кръвен тест за туберкулоза, както и слюнка, урина.

Втората група е изследване с рентгенова и ендоскопия. Инструменталните методи за диагностициране на туберкулоза от своя страна са радиационни и хирургически.

Видове радиационни методи за откриване на болестта

• Флуорографията е метод за диагностициране на заболяване, познато на всеки жител на ОНД. С помощта на рентгенови лъчи се изследват белите дробове и лимфните възли.
• Рентгенография на гръдния кош - подобна на флуорографията, но по-добър метод за откриване на инфекция. Картината е получена по-подробно и в две прогнози, но тази процедура е около шест пъти по-скъпа. Обикновено се използва след сериозни подозрения за заболяването.
• Компютърната томография се извършва като допълнителна диагноза, която се използва и след основателна причина за наличие на инфекция.

Хирургичните методи за диагностика включват бронхиална ендоскопия, както и медиастиноскопия и торакокоскопия.

Първият метод е да се изследва бронхиалното дърво на белите дробове с помощта на „сонда” в този орган. Останалите два метода дават възможност да се изследва плевралната част на белия дроб чрез пункция на гърдите.

И трите метода са сериозна хирургична намеса и се използват най-често в процеса на прогресиране на заболяването.

Лабораторните тестове включват:

• Анализ на храчки за бацила на туберкула.
• Микроскопско изследване.
• PCR диагностика на туберкулоза

Какво е PCR диагноза?

Един от най-модерните методи за лабораторна диагностика на инфекции специалисти наричат ​​полимеразна верижна реакция.

Този метод е разработен от известния американски учен Кари Мулис през 1983 г., за което той е носител на Нобелова награда.

PCR анализът е изолиране на ДНК частици от храчки, кръв, гръбначномозъчна течност, изпражнения и др. за тяхната последваща биосинтеза.

С помощта на комплексно молекулярно генетично изследване се определя естеството на микробите в тялото на пациента.

Този вид анализ за туберкулоза се извършва на няколко етапа:

• Първо се вземат биологични проби. Материалите се поставят в специални контейнери и се изпращат в лабораторията.
• В изследователския център анализите се загряват до 97 градуса. Това позволява да се разруши структурата на генома на ДНК на микроорганизми, която се състои от няколко вериги.
• Температурата е специфично понижена, така че праймерите (участници в ДНК, от които започва процесът на биосинтеза) могат да се свържат към всяка верига на дезоксирибонуклеинова киселина.
• След това се извършва биосинтезата на молекули, необходими за откриване.

След 25-30 повтарящи се цикъла в лабораторните изследвания лекарите имат възможност да разберат дали инфекциозните микроорганизми присъстват в тялото на пациента или не.

Предимства и недостатъци

PCR за туберкулоза е най-модерната диагностична техника. Методът позволява откриването на инфекцията на всеки етап с висока надеждност. предимства:

• Скорост - изследването отнема не повече от пет часа. Резултатите от теста за туберкулозни микроби могат да бъдат намерени в рамките на 24 часа.
• Безопасност - PCR методът няма възрастови противопоказания.
• Навременност - тази техника ви позволява да откривате туберкулоза в тези стадии, когато болестта няма симптоми.
• Висока степен на точност - ако в анализите има само няколко микроорганизма, те ще бъдат намерени чрез полимеразна верижна реакция. Също така, тази техника прави възможно лесното идентифициране на причинителя на туберкулоза.
• Универсалност - диагностиката се използва не само за откриване на консумация, но и за други заболявания като хламидия, гонорея и др.

Въпреки многото предимства, използването на тази техника във вътрешната медицинска практика е по-скоро изключение, отколкото правило. Има няколко причини за това.

Недостатъците на този метод са:

• Високата цена на проучването.
• Методът не е подходящ за тези, които са преминали терапия, тъй като наличието на мъртви бактерии Кох може да доведе до фалшиво-положителен резултат.
• В случай на мутация на инфекциозни микроорганизми, техният геном не може да бъде разпознат чрез погрешно заключение.
• Важно е да изберете правилната среда за откриване. Например, резултатът от кръвен тест за PCR за туберкулоза (разреждане) ще бъде отрицателен, ако нервната система е заразена.
• Не винаги е възможно този метод да се приложи при пациенти с диагноза белодробни лезии.

В допълнение, такъв анализ за туберкулоза изисква модерно оборудване, което 90% от болниците нямат. В ОНД такъв анализ може да се извърши от мрежата на клиники Invitro

Условия за анализ

Препоръки за пациенти, подложени на такъв тест за туберкулоза, варират в зависимост от вида на анализите, които преминават.

Когато вземате кръв за PCR, е необходимо да се въздържате от пушене един час преди процедурата, за двама да спрете приема на алкохолни напитки и мастни храни.

Препоръчително е също така да се въздържат от физическо натоварване, също така е невъзможно да се вземе кръв за туберкулоза на празен стомах.

Когато вземате тампон от устата и носната кухина, не можете да ядете 2-4 часа преди процедурата, в противен случай няма да е информативен. Също така, не пийте алкохол.

За прецизното отчитане е забранено пушенето по-рано от час преди процедурата. В навечерието се въздържайте от миене на зъбите и използване на спрейове и спрейове за устата.

Ако подозирате туберкулоза на урогениталната система, пациентът за 2-3 дни преди раждането трябва да изключи секса, за 2-3 часа преди процедурата, да не отидете в тоалетната “по малък начин”. Гениталните органи трябва да се мият с обикновена вода без специални средства.

На жените се препоръчва да не използват вагинални таблетки, свещи, топки и да се въздържат от тестове в критични дни.

5 дни преди раждането, резултатът е необходим, за да се откаже от процедурата на колпоскопия, както и от трансвагинален ултразвук,

Кога се използва PCR диагностика?

Не всяка клиника има такава сложна диагноза, но лекарите все повече прибягват до такива методи на изследване. Обикновено този вид анализ се извършва в специални ситуации.

• В случай на съмнителни резултати от манта може да се използва кръвен тест за туберкулоза.
• В случаите, когато пациентът е бил в контакт със заразено лице, но лекуващият лекар не може точно да определи диагнозата.
• В случай на спешна операция, когато е необходимо да се установи за кратко време дали пациентът има тази инфекция.
• Когато пациентът е бременна, когато други методи на изследване не са достатъчно безопасни за новородено бебе.

Трябва да се отбележи, че тази диагноза се препоръчва на децата поради нейната безопасност.

Ако студентът има противопоказания срещу туберкулинов тест, той може да вземе кръвен тест за туберкулоза вместо мантия чрез PCR.

PCR диагностика на туберкулоза

Туберкулозата е специфична инфекция, фокусът му може да бъде в човешките тъкани в продължение на години и след това да се разпространи в продължение на няколко месеца. Това е хронично заболяване, чиито оптимални схеми на лечение са трудни за избор. Една от причините за това е късната диагноза, когато микобактериите, докато са в човешкото тяло, вече са се адаптирали към много лекарства.

Какви съвременни методи за диагностика съществуват? PCR диагностика - какво е това? Как се извършват тези изследвания? В какви случаи е диагностицирана туберкулоза по този метод и каква е неговата същност?

Какво е PCR диагностика

Това е един от най-модерните методи за диагностициране не само на болестите, но и на откриването на биологичен материал. PCR диагностиката е изобретена сравнително наскоро. Преди около 30 години през 1983 г. американски биохимик, Кари Банкс Мълис, предложи комплексна схема за възстановяване на биологичния материал от микроорганизми в един кратък сегмент. Благодарение на откритието си, ученият е награден с най-високата награда - Нобелова награда.

Какво е това - PCR диагностика на инфекции? Полимеразната верижна реакция (PCR) е диагноза за откриване на вирусни заболявания, базирана на методите на генното инженерство. Широко се използва в медицинската микробиология, имунология и вирусология. Методът е универсален и помага да се постави диагноза с малко количество материал. Инфекцията може да бъде открита буквално в първите часове на заразяване с нея, много преди появата на първите симптоми на заболяването.

Методът се състои в получаване от материала на болен човек не на самия патоген, а на фрагменти от генома (ДНК частици), неговата биосинтеза с последващо определяне към кой клас микроорганизми е получен генетичният материал чрез молекулярно-генетични методи.

Въпреки факта, че това е сложен процес, отнема много по-малко време от много биологични методи за откриване на инфекциозни агенти. Само за няколко часа може да се открие микроорганизъм чрез PCR. За да направите това, няма нужда да го изолирате от околната среда (кръв, гръбначно-мозъчна течност, храчка) и да го отглеждате дълго време върху изкуствени хранителни среди. Достатъчно е, че малък фрагмент от ДНК веригата на инфекциозния агент присъства в изследвания материал.

В основата на реакцията е възможността при изкуствени условия (in vitro) да се създаде синтез на молекули на нуклеинова киселина на инфекциозния агент.

Какво е необходимо за PCR?

1. Праймерите са ДНК сегментите, от които започва биосинтезата или създаването.
2. Нуклеотиди или комплексни съединения, които са в основата на ДНК или РНК молекула.
3. Полимеразната верижна реакция е невъзможна без наличието на полимераза, която е ензим, ускоряващ PCR.

Етапи на PCR диагностика

Как се осъществява молекулярната диагностика чрез PCR? Процедурата е проста и отнема кратко време, като се взема предвид събирането на материала.

1. Преди започване на изследването, те вземат необходимия биологичен материал - това е бронхиалната промивна вода, кръвта, стомашното съдържание, храчките. Видът на биологичния материал зависи от предполагаемия патоген.
2. Денатурация или унищожаване на първичната структура на ДНК, която се състои от две вериги. Същността на този етап е да се разделят двете вериги под въздействието на висока температура (максимумът е 98 ° C, който продължава не повече от две минути).
3. На следващия етап на PCR, наречен отгряване, температурата се намалява с няколко градуса, така че праймерът ще се свърже с ДНК веригата.
4. Удължение, по време на което директно се осъществява синтеза на желаните молекули.

В резултат на това само 25-30 такива цикъла получават необходимия брой копия на ДНК на микроорганизма, които лесно се разпознават.

Дали PCR изисква диагностициране на туберкулоза?

Не е възможно абсолютно всички хора със съмнение за туберкулоза да извършват PCR, тъй като методът изисква скъпо оборудване. Не всички публични клиники могат да си позволят да я купят. Освен това се случи така, че обичайните методи за диагностициране на инфекция в повечето случаи също се оправдават.

Те включват:

• изследване на пациента, вземане на история;
• пълен преглед на лицето;
• изследване, използващо Mantoux туберкулинов тест;
• радиография или флуорография;
• компютърна диагностика, ако е необходимо;
• микробиологични методи за изследване: микроскопия на намазка и бактериологично изследване на храчка.

PCR за туберкулоза се извършва в специални случаи, когато е трудно да се постави диагноза или не е възможно да се извършат други инструментални методи.

Въпреки изобилието от диагностични методи, честотата на туберкулозата продължава да нараства. В момента има не само растеж, но и други характеристики:

• заболяването често се среща в тежка форма;
• увеличава се броят на фаталните случаи;
• все по-устойчиви на съвременна химиотерапия са диагностицирани форми на заболяването.

Нежеланието на самите хора да се подлагат на рутинни медицински прегледи годишно, отхвърлянето на ваксинацията води до разпространение на туберкулоза. В такива условия са ни необходими бързи, информативни и ефективни изследователски методи, които трябва да бъдат достъпни за деца и възрастни. Всички горепосочени диагностични методи са много по-ниски от PCR.

Ползи от диагностицирането на туберкулоза с PCR

Това изследване, макар и ново, се е доказало добре, особено в спорни случаи, когато е невъзможно да се постави диагноза по редица причини.

Благодарение на PCR е много по-лесно да се открие причинител на туберкулоза в тестовия материал.

Предимствата на PCR диагностиката са следните.

1. Това е бърз анализ. Малък фрагмент от ДНК молекулата може да бъде използван за диагностика само за няколко часа (около пет), който успешно се използва в извънредни ситуации, когато, например, преди операция е необходимо да се определи дали човек е болен от туберкулоза.
2. PCR анализът е позволен в случаите, когато други методи са недостъпни или забранени (за откриване на белодробна туберкулоза, понякога трябва да вземете няколко рентгенографски изображения, които ще бъдат голяма доза радиация).
3. С помощта на PCR, всяка биологична среда се изследва за наличие на патоген в нея. Например, можете да провеждате изследване на гръбначно-мозъчната течност, ако има съмнение за туберкулозен менингит.
4. Позволена PCR диагностика на инфекциозни заболявания при деца, тъй като методът е безопасен.
5. Позволява ви да идентифицирате патогена на всеки етап от заболяването.
6. Високата чувствителност на PCR дава възможност за откриване на Mycobacterium tuberculosis, дори ако в биологичния материал има само няколко микроорганизма.
7. Добре е да се направи диагноза за рецидив на заболяването.

След всички прочетени PCR изглежда почти перфектен диагностичен метод, който трябва да направи всеки с подозрение за туберкулоза. Но има и недостатъци тук, те трябва да бъдат взети под внимание.

Недостатъци на PCR при диагностицирането на туберкулоза

В наше време такава диагностика е по-рядка от редовността. И за това има причина.

1. Това е скъп изследователски метод. В много клиники оборудването за PCR липсва поради високата му цена, но анализът все още може да се направи в платени лаборатории.
2. Веднага след лечението, мъртвите микобактерии или живеещите в малки количества все още могат да присъстват в човешкото тяло (резултатът ще бъде положителен по време на PCR диагностика), така че методът ще бъде ненадежден в този момент, няма смисъл да се извършва.
3. Мутациите на микобактериите водят до неефективна PCR - нормална последователност на ДНК не може да бъде синтезирана.
4. Необходимо е да се избере подходящата среда за изследването, кръв се взима само ако се подозира, че е заразена (сепсис), няма нужда да се приема храчка, ако има въпрос за туберкулоза на органите на нервната система. В този случай PCR няма да може да открие патогена и диагнозата ще бъде неинформативна.

Показания за откриване на туберкулоза чрез PCR анализ

PCR диагностицирането на туберкулоза се извършва най-често при спорни случаи. Кога лекарите правят това изследване?

1. Ако е трудно да се направи диагноза по обичайните налични методи, но има контакт с пациент с туберкулоза.
2. В случай, че човек не може да бъде предаден в клиника, за да премине рутинни рутинни тестове за туберкулоза, е по-лесно да го изследва с помощта на PCR, тъй като храчките за теста могат да бъдат доставени в бурканче и диагнозата се потвърждава в рамките на няколко часа.
3. Ако човек има спешна операция и спешно трябва да разбере дали е болен от туберкулоза.
4. Ако е необходимо, по-добре е бременната жена да се изследва за туберкулоза, използвайки PCR, тъй като методът е безопасен.
5. На платена основа всеки, който не е бил диагностициран с туберкулоза, е бил потвърден с бактериологични методи и флуороскопия. Това се случва, когато лезията в белите дробове е незабележима в директния образ, а човекът по време на раждането на храчки за изследването не може да следва препоръките за правилно събиране на материала. В този случай, човек е притеснен за всички симптоми, характерни за белодробна туберкулоза.
6. Когато има съмнения относно резултатите от теста Манту.
7. За предпочитане е да се направи PCR диагностика на туберкулоза при деца. Процедурата е безопасна, не създава допълнителна радиационна експозиция и е ефективна при откриване на трудни за диагностициране форми на заболяването.

Навременното диагностициране на туберкулозата е ключът към правилно предписаното лечение и намаляването на разпространението на болестта. Често познатите методи за откриване на заболявания не винаги са ефективни. Следователно, PCR днес е един от най-надеждните и безопасни начини за откриване на инфекция в ранните етапи на неговото развитие.

Какво е PCR анализ за туберкулоза

Иновативен метод за откриване на микроорганизми, изобретен от учения Cary Mullis в края на миналия век - PCR анализ. Той получи за своите писания Нобелова награда. Напълно този процес се нарича полимеразна верижна реакция. Състои се в възстановяване на вида на микроорганизма в предоставения биоматериал с помощта на къси ДНК фрагменти. Това ви позволява да откривате инфекция на ранен етап и да започнете лечение незабавно, без да доведе до сериозни симптоми и усложнения.

Какъв е анализът

Диагнозата чрез PCR е да се получат сегменти от патогенна ДНК от биологичен материал и да се подредят в правилната верига. Това позволява идентифицирането на микроорганизма, към който принадлежат клетките.

Процедурата се извършва на три етапа:

1. Събиране на биологичен материал.
2. Идентифициране и подреждане на ДНК.
3. Признаване на инфекция.

Това проучване изисква специално медицинско оборудване - усилвателно. Той е оборудван с камера, където изучаваният материал взаимодейства с високотемпературни и химически ензими. На изхода лабораторният техник има дълга ДНК верига на причинителя, ако има такъв в човешкото тяло.

Как да се подготвим за диагнозата

PCR анализът е сложен процес на генно инженерство, който изисква точност и сериозност както от лабораторните техници, така и от пациентите. Голяма роля в коректността на резултатите от анализа играе подготовката за процедурата, т.е. правилното събиране на материала.

Основните източници на информация за болестта са:

Могат да се използват и други варианти, течности, ако е необходимо, се вземат за анализ от различни органи.

За пациента има определени правила, които трябва да се спазват преди процедурата. Ако има кръвен тест, той е забранен за 8 часа преди събирането:

• ядат храна;
• да пуши;
• Пиене на алкохолни напитки;
• приемайте лекарства вътре.

Вечерта, преди събирането на храчки, лекарството се изпива, за да се разреди и да се улесни отхрачването. Сутрин събирайте материала след пълна хигиена на устната кухина.

Урината се събира в стерилен буркан сутрин на празен стомах, след измиване, преди да се вземе каквото и да е лекарство.

Ако човек приема антибиотици, анализът на полимеразната верижна реакция трябва да се отложи, в противен случай резултатът от PCR не е надежден. Спутумът или кръвта трябва да се дарят две седмици след края на курса на лечение.

Как протича процеса на идентифициране на бактерии

Накратко, процесът е да се изолира част от ДНК. Използването на съвременни методи на генното инженерство ни позволява да определим вида на микроорганизма. Освен това материалът за анализа се нуждае от малко количество.

Технически това е много сложна процедура, но отнема по-малко време от класическите бактериологични изследвания. Не е необходимо патогените да бъдат изолирани от биоматериала, няма нужда да се отглеждат за няколко седмици. В деня на раждането пациентът вече може да знае резултата от своя анализ.

Целият процес на PCR протича на етапи:

1. Работи се с основната форма на ДНК, която при висока температура, близка до 100 градуса, се разделя на две вериги.
2. Температурата намалява, нишките са свързани с фрагментите на нуклеиновата киселина - праймера.
3. Настъпва удължение - синтез на молекулна структура.

Цялата сесия се състои от около тридесет такива процедури, повтаряйки един цикъл като верижна реакция. Това е необходимо, за да се създаде броя на клетките, в които получените бактерии стават разпознаваеми.

Заключение на проучването

Описание на резултата от PCR (полимеразна верижна реакция) дава лекар на туберкулоза, той е прост или разгърнат. В първия случай, описанието ще съдържа само информация за наличието или отсъствието на пръчки Koch. Ако декодирането е подробно, от него можете да разберете степента на заболяването, неговия фокус. Според тези критерии е възможно да се определи най-подходящото лечение за туберкулоза във всеки отделен случай.

Анализът на полимеразата на верижната реакция не прави разлика между живи и мъртви патогени и говори само за тяхното присъствие. Следователно, има смисъл да се премине втори тест за туберкулоза само 3-4 седмици след приемане на терапията, предписана от лекаря.

Ако резултатът е положителен, върху заключението се поставя надпис “Mycobacterium tuberculosis”. Ако има отрицателен резултат, до биологичното име на бактериите има знак "не е открит". Анализите могат да бъдат фалшиво положителни. Това се случва рядко - в случай на нарушение на техниката на провеждане на PCR проучвания или в присъствието на нежизнеспособни микроорганизми. Окончателното заключение за заболяването може да бъде направено само от лекар по туберкулоза.

Предимства на метода

PCR диагностиката на туберкулозата придоби популярност по много причини. Той има много предимства, включително:

1. Точност на изследванията. При анализиране на технологията е възможно да се идентифицират бактерии, дори ако те се намират в малки количества.
2. Бърз резултат. Целият процес от събирането на материала до крайния изход отнема около 5 часа. В сравнение със засяването, тя трябва да изчака до няколко седмици.
3. Пълна безопасност за човека, за разлика от флуорографията с радиацията.
4. Използва се всеки течен биоматериал. За PCR при белодробна туберкулоза, храчките дават най-точна информация, при туберкулозен менингит се взема проба от гръбначния мозък. Анализ на кръвта помага да се идентифицират локалните огнища на инфекцията.
5. Изследва се чувствителността на бактериите към антибиотици. Това ви позволява да предпише правилното лечение.
6. Ранна диагностика. Можете да научите за наличието на болестта преди началото на симптомите.

В допълнение към положителните аспекти, има и недостатъци. Основната е цената. Анализът на PCR не е евтин, което е свързано с използването на скъпо оборудване. Друг недостатък е необходимостта да се изчака времето за повторно тестване след курс на лечение за туберкулоза. Понякога резултатът от теста е фалшиво положителен. Това се случва поради бактериална мутация.

Когато е необходима PCR

PCR за белодробна туберкулоза няма противопоказания и е абсолютно безопасна. Следователно има определени ситуации и болести, когато това е единствената възможност за изследване.

Те включват:

• бременност;
• контакт с туберкулозен пациент;
• трудности при определяне на диагнозата на белодробна болест;
• преглед преди операция;
• алергична реакция;
• HIV инфекция;
• млада възраст.

Можете да използвате метода на PCR в посока, която се издава в фтизиатрията, както и педиатър, лекар или пулмолог.

Какво може да замени PCR диагнозата туберкулоза

Други видове изследвания не са остарели, но продължават да се използват. Те се използват в случаите, когато не е възможно да се извърши PCR за туберкулоза. Освен това съвременният метод не е идеален, понякога неговите показатели се поставят под въпрос и изискват повторна проверка.

Следните методи помагат да се определи наличието на туберкулоза при човек:

• туберкулинова диагноза (Mantoux);
• рентгеново;
• Тестване на биологичен материал за флора;
• рентгенова снимка на белите дробове.

Тези изследвания са безплатни и достъпни за всички. Но те имат своите недостатъци:

• Тестът за туберкулоза причинява алергии. Противопоказан при кожни заболявания.
• Рентгеновите изследвания са придружени от радиация, която не е приложима за деца, хора с имунен дефицит и бременни жени.
• Бактериологичните анализи отнемат много повече време, резултатът може да се изчака до един месец.

Алтернативите не са гаранция за стопроцентно правилно заключение. Най-често те се използват за превантивни цели. Диагностика на туберкулоза чрез PCR дава най-надеждната информация. Ако е възможно, по-добре е да го използвате.

Особености на туберкулозата при деца и необходимостта от PCR

Детето трябва да бъде особено защитено от болестта - туберкулозната инфекция може да причини сериозно увреждане на тялото с още не напълно оформен имунитет.

След въвеждане на палката на Кох в детския организъм, развитието на болестта преминава през следните етапи:

• Латентен. Продължава до една година, без да показва никакви симптоми.
• Интоксикация. Засяга цялостното здраве. Появява се слабост, апатия, липса на апетит, сънливост и намалена производителност. Постоянно леко повишена температура.
• Основната форма на заболяването. Туберкулозата е локализирана, формирайки фокуса на заболяването. Детето има кашлица, задух, главоболие, подути лимфни възли.
• Туберкулозен бронхоаденит. Симптомите са болки в лопатките, кашлица с различна височина на звука, хрипове.

Обикновено, туберкулин се инжектира, за да се идентифицира инфекцията под кожата на детето. Ако този вид изследване е противопоказано, тогава PCR за туберкулоза е незаменим вариант за диагностика. Децата обикновено вземат кръвен тест, но ако е необходимо, се събира слюнка. При най-малкото подозрение за наличието на туберкулоза се провеждат допълнителни изследвания, за да се гарантира положителен резултат и незабавно да се започне лечение на ранен етап, като се предотвратява развитието на болестта.

Съвременните изследователски методи винаги са по-бързи и по-надеждни. Жалко е, че поради скъпото оборудване, за да се направят такива тестове, има възможност не във всички лечебни заведения и населени места. Какъв начин за провеждане на прегледа обикновено се избира от лекаря, но пациентът има право да избира. Ако трябваше да направите PCR тест, кажете ни за него в коментарите. Ако статията е полезна за вас, споделете я в социалните мрежи - може би това ще помогне на вашите приятели.