PCR диагностика на туберкулоза при деца и възрастни: показания за

Преди 20 години Световната здравна организация призна, че степента на разпространение на туберкулозата е извън контрол и е достигнала мащаба на епидемия. Оттогава ситуацията не се е подобрила. Всяка година се диагностицират повече от един милион случая на болестта, от които почти една четвърт са фатални. През последното десетилетие заболеваемостта сред децата се е повишила, повечето форми на заболяването не се поддават на стандартна антибиотична терапия.

Днес една от глобалните задачи на медицината е разработването на такива диагностични методи, които ще позволят да се идентифицира патологията преди началото на изразени клинични симптоми. Една от тях е полимеразната верижна реакция (PCR) за туберкулоза, която помага за откриване на причиняващите болестните коки пръчки в кръвта, храчките и други биологични течности.

Диагностика на туберкулоза

Скрининговите тестове са насочени към откриване на пациенти, носители на туберкулоза и предотвратяване на разпространението на инфекцията в обществото. За деца под 14-годишна възраст се използва мантовият тест. Това е имунологичен тест, при който се инжектира подкожно доза туберкулин - сложна смес от генетичния материал на няколко вида микобактерии. Появата на силно изразена реакция показва активно протичащ инфекциозен процес.

За профилактичен преглед при възрастни, използващи флуорография или рентгенови лъчи. Тези методи помагат да се визуализират патологични лезии в белодробната тъкан. Това обаче създава трудности при диференцирането на туберкулозата от друга органична патология (злокачествени и доброкачествени новообразувания, възпалителни процеси, паразитни инвазии, професионално увреждане на белите дробове).

За да се изясни структурата и размера на патологичния фокус, може да са необходими допълнителни инструментални изследвания:

• целенасочена радиография;
• компютърна томография;
• магнитен резонанс.

Методи за диагностициране на туберкулоза

В случай на съмнителни резултати и за назначаване на адекватна терапия, има нужда от по-точни диагностични методи, които позволяват да се изолира патогенът. Микроскопското и бактериологичното изследване на храчките се използва за дълго време за потвърждаване на белодробните форми на туберкулоза.

През последните години честотата на микобактериите на различни органи и системи - бъбреците, костите, червата, кожата - става все по-честа. За идентифициране на тези форми на туберкулоза, ултразвукови изследвания, култура на урина и фекалии, могат да се използват ендоскопски изследвания.

PCR диагностика за туберкулоза ще помогне да се потвърди наличието на кочовите пръчки в кръвта, както и неговата чувствителност към определени лекарства. Това е високо ефективен метод, основан на откриването на бактериален генетичен материал в различни биологични течности.

Специфичност и показания

Полимеразната верижна реакция е високочувствителен микробиологичен диагностичен метод, който се основава на принципите на генното инженерство. За да се потвърди наличието на патоген в биологичен материал, достатъчно е да се открие уникален фрагмент от нуклеинова киселина за него. PCR за туберкулоза може да открие бактерии в кръвта, слюнката, урината.

В момента са разработени няколко метода за анализ. Най-популярни сред тях са следните:

• PCR в реално време;
• микрофлуидна технология;
• последователност и пиросеквениране.

PCR в реално време

Лабораториите най-често използват полимеразно-верижна реакция в реално време, тъй като намалява броя на фалшиво-положителните резултати, а самият процес на анализ отнема кратко време.

Предвид големия брой скрити форми на заболяването и неефективността на стандартните диагностични методи, PCR се използва все повече. Целта на този анализ е показана на:

• идентифициране на подозрителни зони на рентгеновия лъч;
• съмнителни резултати от туберкулинов тест;
• невъзможността за провеждане на микроскопски и бактериологичен анализ на храчки при лица в тежко състояние;
• провеждане на хирургични интервенции, когато е необходимо бързо да се гарантира, че няма инфекция;
• недопустимост на използването на флуорография, рентгенови лъчи или компютърна томография (например при бременни жени и кърмене в случаи на свръх радиационна експозиция);
• съмнение за извънбелодробна туберкулоза (препоръчва се да се използва не само кръв, но и храчки).

PCR диагностиката на туберкулозата се е доказала при изследването на деца, поради липсата на допълнителна експозиция и бързи резултати.

Процедура за подготовка и анализ

Не се изисква специален препарат за кръвна PCR. Въпреки това, за да се избегнат усложнения при вземането на кръвни проби и за да се получи висококачествен материал, трябва да се следват следните общи правила:

• анализът трябва да се прави сутрин не по-рано от 2 часа след събуждане;
• Трябва да ограничи приема на мазнини и пържени храни на ден преди вземането на кръв;
• да се въздържат от ядене, чай и кафе в продължение на 8-9 часа, да се пие чиста вода;
• Не пушете в продължение на поне 3-4 часа.

В случай на постоянни медикаменти (хормони, антикоагуланти, противовъзпалителни средства, антибиотици, разредители за кръв), трябва да уведомите лаборанта за това.

При доставка на храчки трябва добре да миете зъбите си и да изплаквате устата си няколко пъти. Събирайте материал в стерилен контейнер. За по-добри резултати може да се вземе отхрачващо или муколитично средство вечер.

Самата диагноза се състои от няколко етапа.

Ограден материал. Тя може да се извърши в лаборатория и дистанционно. Някои видове материал, който пациентът събира самостоятелно (урина, храчки).

Разрушаването на структурата на нуклеиновите киселини (денатурация на молекули ДНК и РНК). За тази цел тестовият материал се загрява до температура от 98 градуса и се държи в продължение на няколко минути. В резултат на това двойната спирала се разтваря, образуват се едноверижни молекули.

Шега. След добавяне на грунд (кратък участък от нуклеинова киселина), температурата намалява с няколко градуса, активира се полимеразата.

Elognatsiya. Температурата се довежда до оптимално ниво, ензимната активност достига максимум и втората верига завършва в съответствие с Chargaff правилото за комплементарност.

За завършване на изследването е необходимо да се синтезира необходимия брой ДНК молекули - около 50 цикъла на горната реакция. Отнема около 2-3 часа. Положителният резултат от реакцията не винаги показва активния стадий на заболяването, но е индикатор за наличието на микроорганизъм в организма.

Предимства и недостатъци на метода

В сравнение с други микробиологични методи, PCR не отнема много време за откриване на Mycobacterium tuberculosis с помощта на PCR, резултатът може да бъде получен в деня на изследването.

Друго предимство е високата специфичност на анализа, която дава възможност да се открие наличието на патогена с точност 90-95% в почти всеки биоматериал (кръв, урина, фекалии, гръбначно-мозъчна течност, слюнка, зачервяване на бронхи).

Въпреки това, съществуват няколко недостатъка на метода:

• доста висок процент на фалшиво положителни резултати (до 15%), което е свързано с откриването на неживи микроорганизми;
• в някои случаи можете да пропуснете факта на заболяването, тъй като Mycobacterium tuberculosis често е подложен на мутации и промени в неговия генетичен материал;
• ниска ефективност при изследване на хора с имунен дефицит;
• високи разходи за изследвания, необходимостта от скъпо оборудване и реактиви.

Какво може да бъде заменено?

Предвид разнообразието от форми на туберкулозна инфекция, за по-точна диагноза и избор на лечение е необходимо да се комбинират няколко диагностични изследвания:

Задължителният анализ за децата е тестът на Манту. Ако въвеждането на туберкулин (генетичен материал от микобактерии) се прояви явно реакция, може да се предположи, инфекция с туберкулозен бацил.

Рентгенови методи могат да се използват за визуализиране на патологичния фокус. При диагностицирането на екстрапулмонална туберкулоза се използват ендоскопски методи с едновременна биопсия:

• бронхоскопия помага да се идентифицират лезии на ларинкса, трахеята, бронхите;
• колоноскопия - черва;
• цистоуретроскопия - органи на отделителната система;
• хистероскопия - женски полови органи. Тези методи не са специфични, за да се направи точна диагноза, патогенът трябва да бъде идентифициран.

Общите клинични тестове ще помогнат за по-конкретно определяне на състоянието на организма. Необходима е пълна кръвна картина с левкоцитна формула.

Увеличаването на броя на неутрофилите с понижено ниво на лимфоцити и увеличаване на скоростта на утаяване на еритроцитите (ESR) показва активен възпалителен процес на бактериална етиология. Да се ​​изключи увреждане на органите на отделителната система, като се използва общ анализ на урината и култура за стерилност.

Понастоящем PCR се предлага в повечето частни лаборатории. Това изисква не само висококвалифицирани специалисти, но и скъпо оборудване, голям брой реактиви. Следователно използването на този метод е ограничено, въпреки високата му точност и специфичност.

PCR анализ за туберкулоза

В случай на съмнение за заболяване е по-добре незабавно да се премине към PCR анализ за туберкулоза. По време на това изследване се взема кръв, която се проверява под микроскоп. Полимерната верижна реакция все повече започва да замества теста Манту за откриване на туберкулоза.

Предимства на метода

Този анализ след няколко часа определя наличието на патогена. Освен това, ако в тялото има малко количество бактерии, този метод ще може да ги идентифицира.

Основните предимства на PCR теста са следните положителни точки:

1. Заболяването се открива в 100% от случаите.
2. Спецификата на ДНК на офиса е висока.
3. Анализът разкрива причинителя за 4-4,5 часа.
4. Белодробната туберкулоза е успешно диагностицирана, с която други методи не могат да се справят.
5. Способността да се открие специфичен фрагмент, който се съдържа в този патоген.

Полимерната верижна реакция дава възможност не само за своевременно идентифициране на причинителя и за започване на лечението на пациента, но и за изолиране на човек от обществото в случай на инфекция. Жезълът на Кох - причинител на туберкулоза - може да бъде намерен навсякъде в тялото. И само PCR анализът позволява да се идентифицира на място.

Изследването на PCR също дава възможност да се избере лекарство в зависимост от чувствителността на микроорганизмите.

Описание на заболяването

През деветнадесети век туберкулозата се нарича консумация. Заболяването е инфекция на вътрешните органи, главно на белите дробове. Туберкулозата се предава чрез въздушно кихане и кашляне. Предметът на инфекцията може да бъде както човешки, така и животински.

След проникването на туберкулозната бактерия в тялото, болестта може да продължи дълго време в латентна форма.

В зависимост от степента на експозиция на болния към други лица, се различават 2 форми на заболяването:

1. Затворена форма на туберкулоза. Не е опасно, защото човек не може да заразява другите. Дори при анализи, вкл. и PCR, не са открити микобактериални заболявания. Но опасността все още съществува в тази форма по всяко време затворената форма може да отиде на открито. Такава активна форма на туберкулоза може да бъде опасна не само за самия пациент, но и за хората около него.
2. Отворена форма на инфекция. Когато е в биологични течности на човек се открива коша. Пациент с туберкулоза на този етап носи особена заплаха за хората около него. Можете да се заразите, дори ако превозвачът внимателно следи за хигиена.

Най-честите методи за изследване, използвани за идентифициране на заболяването, включват:

1. Флуорография.
2. Томография на гръдния кош или други засегнати области.
3. Радиографско изследване.
4. Изследване на биологичните материали на пациента.
5. Туберкулинов тест (Манту).

Най-ефективните начини за идентифициране на бацила Кох е молекулярно-генетичният анализ на полимеразната верижна реакция - PCR диагностика на туберкулоза.

Проучване на туберкулозата

Полимеразната верижна реакция е най-точният молекулярно-генетичен анализ. Ако настъпи инфекция с туберкулозна инфекция, тестът на полимера от изследването позволява точно да се идентифицира ДНК или РНК на патогена. За да направите това, дарявате кръв или друга биологична течност.

За да се определи наличието на туберкулоза, достатъчно е минимално количество бактерии, дори и една клетка.

Други предимства на PCR диагностиката са следните:

1. При този анализ се използва специален ензим, благодарение на който се открива точното наличие на туберкулозна инфекция.
2. PCR анализът е особено чувствителен към инфекции с микобактерии, така че точността на диагностиката е еквивалентна на почти 100%.
3. Още след 3.5-5.5 часа след провеждане на теста ще бъде възможно да се знаят резултатите от анализите.

При заболяване като туберкулоза е много важно да се идентифицира патологията в ранните му стадии. Следователно, тестът за полимеразна верижна реакция е най-информативен в този случай. Когато бактериите започват да атакуват, те трябва да бъдат открити колкото е възможно по-рано, докато тяхното въздействие не повлияе на жизнените функции на вътрешните органи.

PCR анализът има и друго предимство пред други видове изследвания: техниката определя чувствителността на микроорганизмите към конкретно лекарство, което позволява терапията да бъде най-ефективна.

Подготовка за PCR тестване

Ако слюнката попадне, се изисква подготовка за това. 12 часа преди процедурата трябва да се откажете от пушенето, алкохола, медикаментите и храната. Мийте зъбите си, изплаквайте устата си с различни освежители и дори забранявайте използването на зъби. Също така, не можете да използвате червило и живеят сексуален живот. Необходимо е да се изплакне устната кухина с преварена вода.

Не само туберкулозата се открива чрез PCR метода. По същия начин могат да бъдат открити не по-малко сериозни заболявания като херпес, хламидия, мононуклеоза, пневмония, баролеоза, ХИВ, хепатит, рубеола.

Най-често кръвта се взема от вена, но в някои случаи може да е необходим напълно различен биологичен материал:

1. Слюнката.
2. Анализ на урина
3. Изстъргване от всяка част на тялото.
4. Сексуална секреция.
5. Кал.
6. Спинална течност.
7. Флегма от бронхите по време на отхрачване.
8. Анализ на слуз.

Но най-информативният метод на PCR все още е кръвен тест за туберкулоза.

Събиране на биоматериал

Въпреки факта, че процедурата за идентифициране на патогена по метода на PCR отнема само 4-4,5 часа, тя е сред най-трудните видове диагноза. Много фактори могат да повлияят на точността на резултатите. Например, необходимо е да се събират проби за изследвания в съответствие с определени правила. Основната е повишената стерилност в събирането на биологичен материал. Ето защо, този анализ е трудно да се проведе малко дете.

Ако проба се взема като кръв от вена, тогава специалистът извършва кръвен тест за PCR за туберкулоза не само със стерилна спринцовка, но и съгласно всички правила на общата хигиена.

Кръвта се събира в специална епруветка и през цялото изследване се съхранява в такива условия, които предотвратяват нейното съсирване.

Ако това е PCR анализ на урината за туберкулоза, тогава течността се събира рано сутрин, когато човекът е просто буден. Преди да отидете в тоалетната, пациентът взема душ и след това взема стерилен контейнер, за да събере урината.

В случай на бракуване от гениталиите, както на жените, така и на мъжете, цялата процедура се извършва в медицинско заведение.

Има по-сложни тестове, като вземане на течност от гръбначния мозък. В този случай всички действия се извършват в болницата от опитни лекари.

Най-често преминаването на анализа на полимерната верижна реакция се възлага в такива случаи:

1. Да се ​​диагностицира заболяване в белодробната тъкан.
2. Да се ​​идентифицира източникът на болестта.
3. Да се ​​идентифицира заболяването извън белите дробове.
4. За да се диагностицира рецидивът на заболяването.

Последователността на теста

Диагностика на туберкулоза при деца и възрастни с помощта на полимерна верижна реакция преминава през следните стъпки:

1. В определени ситуации се вземат различни материали за изследвания. Това може да бъде кръв, слюнка или бронхиална промивка.
2. След това взетият биологичен материал е изложен на високи температури (до + 97 ° С) за определено време (най-често няколко минути). В резултат на това първоначалната структура на ДНК на микроорганизми, която се състои от 2 вериги, се унищожава.
3. След това температурата започва да намалява, това действие се нарича отгряване. По това време, праймерът се свързва с 1 от изключените вериги.
4. В края на удължението се извършва. По време на него настъпва необходимия биологичен синтез на съществуващи молекули.

Ще са необходими 25-30 цикъла, за да се получи необходимия брой копия на ДНК върху Mycobacterium tuberculosis.

Процедурата изисква скъпо оборудване, така че не всички медицински институции имат възможност да проведат PCR тест за туберкулоза вместо Манту.

Благодарение на ваксинациите и изследването на PCR (вместо Mantoux) е възможно да се предотврати развитието на такова опасно заболяване като туберкулоза. Сега не е нужно да чакате началото на заболяването или да правите снимки на рентгеновия апарат. Ако има подозрения за инфекция, за да се премахнат ужасните последици от заболяването, винаги можете да направите PCR тест, който определя максимално точно състоянието на тялото. В реално време такива диагностични форми като теста Манту и флуорографията постепенно избледняват на фона на PCR метода.

Методи за изследване на храчки при туберкулоза

Анализът на храчките за туберкулоза е включен в набор от диагностични мерки, необходими за идентифициране и изясняване на диагнозата. Съдържанието на слюнка ще помогне да се направи компетентен режим на лечение.

Как да преминат тест за храчки за туберкулоза

Лекарите са разработили правила за извършване на анализа. Слюнката се събира сутрин, преди човек да закусва. Първо, пациентът извършва хигиенни процедури:

• почистване на зъбния емайл;
• внимателно изплакване с чиста вода на устната кухина и фаринкса.

След това започва незабавното доставяне на материал за анализ. Как да преминат тест за храчки? Изисквания за процедурата:

1. Подготовката започва предварително, вечер. Пациентът се насърчава да приема специални лекарства, които ще направят белодробната секреция по-естествена. Това са отхрачващи и изтъняващи съединения. Ако такива процедури не помогнат, инхалирайте с фармацевтичен състав за отхрачване.
2. Подгответе контейнери за храчки. Слузта трябва да се събира в стерилизирани съдове, плътно и плътно да се затваря.
3. Преди раждането кашляйте и плюйте в контейнер. Обемът на слюнката не трябва да бъде голям, той изисква слюнка от ларинкса. Бактериите в устната кухина са външни при анализа.
4. Събирайте слюнка в стая с отлична вентилация. Анализът се извършва чрез отваряне на кърмата, задействане на качулката. Препоръчително е да отворите прозорците или да излезете на чист въздух.

По време на процедурата в стаята е забранено да влизат. Аутсайдерите могат да допринесат за микрофлората на офиса, а оттам и за храчките, патологичните образувания. Медицинските работници получават анализ в специална маска (респиратор).

Анализ на слюнка за транскрипт на туберкулоза

Декодирането започва с разглеждане на външния вид на слузта. Патологията характеризира промяната в цвета - става тъмна, с видими примеси на кръвта. Цветът не е основният индикатор. Слюнката става тъмна от пиенето на червено вино, страст от кафе. Някои лекарства и цветни напитки променят външния вид на слуз.

Събраният материал се дешифрира по два показателя, т.е. лекарите получават два резултата:

Положителен отговор

Анализът на получената слюнка потвърждава наличието на болестта в организма. Което потвърждава това:

• чужди тела или неизвестни включвания;
• наличието на съсиреци на слуз;
• видими ивици;
• неприятна гнойна или инфекциозна миризма;
• гной.

Макроскопски метод на изследване дава други данни:

• фибринозни конволюции;
• Кох памучни форми за леща;
• продукти от разпадане на бактериални вещества;
• остатъци от патологичния процес в белодробната тъкан.

Положителният резултат показва увеличено количество протеинови съединения. Достига до 100-120 г / л.

Друг микроскопичен метод позволява да се идентифицират други опасни елементи:

• алвеоларни макрофаги;
• надценен състав на левкоцити;
• високо ниво на лимфоцити.

За туберкулоза човек често се опитва да плюе от устата си. Hemoptysis увеличава образуването на червени кръвни клетки. Обемът на слюнката в устата е такъв, че човек не може да го погълне, без да забележи. Нейната повече, отколкото в здравословно състояние.

Отрицателен отговор

Проучването показва, че броят на левкоцитите е малък, съответства на нормата. Микробактериите също не са открити. Ако пациентът не се чувства здрав, тогава специалистът ще предпише допълнително изследване. Възможно е заболяването да е свързано с белодробна болест. Видовете и методите на допълнителна диагностика зависят от симптомите и състоянието на пациента.

Как е изследването на слуз

Туберкулозата е опасен патологичен ефект върху белодробната тъкан, наблюдава се тяхното разпадане. Анализът се извършва по няколко метода. Най-често срещаният - ELISA (имуноанализ). Същността на метода:

1. Към разтвора, в който е поставена част от храчките, се добавят антитела.
2. Проверете концентрацията на антигени в сравнение с нормата за здраво тяло.
3. Определете активността на патологичната среда.
4. С диагноза.

Втората версия на лабораторните изследвания е ОТПАДЪЦИ. За метода вземете специално медицинско оборудване. Същността на хардуерното изследване:

1. В слюнката се инжектира микросреда за предвидения тип инфекция.
2. Апаратът започва да расте при определена температура бактерии.
3. В процеса се произвежда въглероден диоксид и сензорите го вземат.
4. Газът се комбинира с боята.
5. На индекса на флуоресценция направете изводи за вида на заболяването.

Най-лесният начин е културният. Флегма, засята в специална среда. Лекарят изследва видовете колонии от микробни образувания. Методът е най-дълъг, но ви позволява да докажете диагнозата. Използва се много рядко, именно поради дълъг период от време, който не винаги е подходящ за пациента.

Анализ на храчки за туберкулоза

PCR е съкращение от медицинската терминална полимеразна верижна реакция. Диагностиката е едно от най-новите разработки на учените. Той е открит през 1983 г., значението на откритието е оценено в света, ученият получи най-високото признание - Нобеловата награда.

Методът се основава на използването на генно инженерство. Неговата гъвкавост в нуждата от малко количество материал за точна диагноза. Идентифициране на инфекция с туберкулоза е наистина в ранните часове на инфекцията, без да се чака развитието на болестта.

Същността на метода, който е полимераза:

• пациентът взема фрагмент от ДНК частици;
• провеждане на биологичен синтез на материала;
• определя се от класа на микроорганизмите.

Процесът е технологично сложен, включва молекулярно-генетично изследване. PCR за туберкулоза отнема буквално няколко часа. Времето, необходимо за други методи, не може да се сравни с него по скорост. След като е преминал анализа, пациентът чака откриването на причинителя. Процесът, който е в основата само на един специалист, може да разбере. Един обикновен човек не разбира тънкостите на метода.

Как се диагностицира туберкулозната проба:

1. Вземете необходимия материал за анализ. Какво би могло да бъде това: кръв, стомах, храчки, вода, измити с бронхи.
2. Видът на материала се избира в зависимост от вида на патогенната инфекция.
3. Следващата стъпка е да се проучи верижната връзка. Две вериги са подложени на високи температури до 98 градуса. Етапът се нарича денатурация (разрушаване на структурната ДНК верига). Време за експозиция на температурата - до 2 минути.
4. Следващият етап е отгряване. Температурата се намалява, праймерът се оставя да се свърже с ДНК веригата.
5. В резултат на това се наблюдава удължаване - синтеза на молекули, необходими за процеса.

За такъв анализ е необходимо специално оборудване. Това е скъпо, така че не е налично в нито едно здравно заведение. PCR се извършва в трудни случаи, когато няма точен резултат от конвенционалните диагностични методи, не е възможно да се проведат инструментални методи за проверка на състоянието на пациента.

Предимствата на PCR технологията:

1. Скоростта на получаване на резултата. Приблизително 5 часа лекар има точни данни. Тази скорост ви позволява да помогнете на пациента в спешен случай. По-често това е предоперативният период.
2. Разрешено е, когато не могат да се използват други методи. Например, честото повторение на рентгеновите лъчи води до радиация. PCR не е опасна за пациента.
3. Можете да изследвате всяка биологична среда. Идентифицират се дори сложни форми на туберкулоза.
4. Следователно методът е безопасен и подходящ за деца.
5. Инфекцията се открива на всеки етап.
6. PCR не позволява да се скрие дори малък брой бактериални микроформи.
7. Подходящ за проверка на възможния рецидив на туберкулоза.

Колко струва анализ на храчки при туберкулоза

Пробите се вземат повече от веднъж. Повторенията изключват възможността за грешки или получаване на материал с ниско качество, който не отразява истинското положение и състояние на пациента. Колко пъти за събиране на храчки, кажете на лекуващия лекар. Най-добрият вариант е три пъти на ден. Понякога може да са необходими допълнителни проби. През какви периоди от време събират:

1. Преди ядене сутрин.
2. 3-4 часа след първия тест.
3. На втория ден, също преди хранене.

Туберкулозата е опасна болест, която може да засегне организма на всяко лице. Има много ситуации на инфекция. При всяко подозрение за възможността от инфекция, не чакайте ярки симптоми. Тя трябва да бъде тествана, изследвана и навреме, за да започне лечението.

PCR диагностика на туберкулоза

Туберкулозата е специфична инфекция, фокусът му може да бъде в човешките тъкани в продължение на години и след това да се разпространи в продължение на няколко месеца. Това е хронично заболяване, чиито оптимални схеми на лечение са трудни за избор. Една от причините за това е късната диагноза, когато микобактериите, докато са в човешкото тяло, вече са се адаптирали към много лекарства.

Какви съвременни методи за диагностика съществуват? PCR диагностика - какво е това? Как се извършват тези изследвания? В какви случаи е диагностицирана туберкулоза по този метод и каква е неговата същност?

Какво е PCR диагностика

Това е един от най-модерните методи за диагностициране не само на болестите, но и на откриването на биологичен материал. PCR диагностиката е изобретена сравнително наскоро. Преди около 30 години през 1983 г. американски биохимик, Кари Банкс Мълис, предложи комплексна схема за възстановяване на биологичния материал от микроорганизми в един кратък сегмент. Благодарение на откритието си, ученият е награден с най-високата награда - Нобелова награда.

Какво е това - PCR диагностика на инфекции? Полимеразната верижна реакция (PCR) е диагноза за откриване на вирусни заболявания, базирана на методите на генното инженерство. Широко се използва в медицинската микробиология, имунология и вирусология. Методът е универсален и помага да се постави диагноза с малко количество материал. Инфекцията може да бъде открита буквално в първите часове на заразяване с нея, много преди появата на първите симптоми на заболяването.

Методът се състои в получаване от материала на болен човек не на самия патоген, а на фрагменти от генома (ДНК частици), неговата биосинтеза с последващо определяне към кой клас микроорганизми е получен генетичният материал чрез молекулярно-генетични методи.

Въпреки факта, че това е сложен процес, отнема много по-малко време от много биологични методи за откриване на инфекциозни агенти. Само за няколко часа може да се открие микроорганизъм чрез PCR. За да направите това, няма нужда да го изолирате от околната среда (кръв, гръбначно-мозъчна течност, храчка) и да го отглеждате дълго време върху изкуствени хранителни среди. Достатъчно е, че малък фрагмент от ДНК веригата на инфекциозния агент присъства в изследвания материал.

В основата на реакцията е възможността при изкуствени условия (in vitro) да се създаде синтез на молекули на нуклеинова киселина на инфекциозния агент.

Какво е необходимо за PCR?

1. Праймерите са ДНК сегментите, от които започва биосинтезата или създаването.
2. Нуклеотиди или комплексни съединения, които са в основата на ДНК или РНК молекула.
3. Полимеразната верижна реакция е невъзможна без наличието на полимераза, която е ензим, ускоряващ PCR.

Етапи на PCR диагностика

Как се осъществява молекулярната диагностика чрез PCR? Процедурата е проста и отнема кратко време, като се взема предвид събирането на материала.

1. Преди започване на изследването, те вземат необходимия биологичен материал - това е бронхиалната промивна вода, кръвта, стомашното съдържание, храчките. Видът на биологичния материал зависи от предполагаемия патоген.
2. Денатурация или унищожаване на първичната структура на ДНК, която се състои от две вериги. Същността на този етап е да се разделят двете вериги под въздействието на висока температура (максимумът е 98 ° C, който продължава не повече от две минути).
3. На следващия етап на PCR, наречен отгряване, температурата се намалява с няколко градуса, така че праймерът ще се свърже с ДНК веригата.
4. Удължение, по време на което директно се осъществява синтеза на желаните молекули.

В резултат на това само 25-30 такива цикъла получават необходимия брой копия на ДНК на микроорганизма, които лесно се разпознават.

Дали PCR изисква диагностициране на туберкулоза?

Не е възможно абсолютно всички хора със съмнение за туберкулоза да извършват PCR, тъй като методът изисква скъпо оборудване. Не всички публични клиники могат да си позволят да я купят. Освен това се случи така, че обичайните методи за диагностициране на инфекция в повечето случаи също се оправдават.

Те включват:

• изследване на пациента, вземане на история;
• пълен преглед на лицето;
• изследване, използващо Mantoux туберкулинов тест;
• радиография или флуорография;
• компютърна диагностика, ако е необходимо;
• микробиологични методи за изследване: микроскопия на намазка и бактериологично изследване на храчка.

PCR за туберкулоза се извършва в специални случаи, когато е трудно да се постави диагноза или не е възможно да се извършат други инструментални методи.

Въпреки изобилието от диагностични методи, честотата на туберкулозата продължава да нараства. В момента има не само растеж, но и други характеристики:

• заболяването често се среща в тежка форма;
• увеличава се броят на фаталните случаи;
• все по-устойчиви на съвременна химиотерапия са диагностицирани форми на заболяването.

Нежеланието на самите хора да се подлагат на рутинни медицински прегледи годишно, отхвърлянето на ваксинацията води до разпространение на туберкулоза. В такива условия са ни необходими бързи, информативни и ефективни изследователски методи, които трябва да бъдат достъпни за деца и възрастни. Всички горепосочени диагностични методи са много по-ниски от PCR.

Ползи от диагностицирането на туберкулоза с PCR

Това изследване, макар и ново, се е доказало добре, особено в спорни случаи, когато е невъзможно да се постави диагноза по редица причини.

Благодарение на PCR е много по-лесно да се открие причинител на туберкулоза в тестовия материал.

Предимствата на PCR диагностиката са следните.

1. Това е бърз анализ. Малък фрагмент от ДНК молекулата може да бъде използван за диагностика само за няколко часа (около пет), който успешно се използва в извънредни ситуации, когато, например, преди операция е необходимо да се определи дали човек е болен от туберкулоза.
2. PCR анализът е позволен в случаите, когато други методи са недостъпни или забранени (за откриване на белодробна туберкулоза, понякога трябва да вземете няколко рентгенографски изображения, които ще бъдат голяма доза радиация).
3. С помощта на PCR, всяка биологична среда се изследва за наличие на патоген в нея. Например, можете да провеждате изследване на гръбначно-мозъчната течност, ако има съмнение за туберкулозен менингит.
4. Позволена PCR диагностика на инфекциозни заболявания при деца, тъй като методът е безопасен.
5. Позволява ви да идентифицирате патогена на всеки етап от заболяването.
6. Високата чувствителност на PCR дава възможност за откриване на Mycobacterium tuberculosis, дори ако в биологичния материал има само няколко микроорганизма.
7. Добре е да се направи диагноза за рецидив на заболяването.

След всички прочетени PCR изглежда почти перфектен диагностичен метод, който трябва да направи всеки с подозрение за туберкулоза. Но има и недостатъци тук, те трябва да бъдат взети под внимание.

Недостатъци на PCR при диагностицирането на туберкулоза

В наше време такава диагностика е по-рядка от редовността. И за това има причина.

1. Това е скъп изследователски метод. В много клиники оборудването за PCR липсва поради високата му цена, но анализът все още може да се направи в платени лаборатории.
2. Веднага след лечението, мъртвите микобактерии или живеещите в малки количества все още могат да присъстват в човешкото тяло (резултатът ще бъде положителен по време на PCR диагностика), така че методът ще бъде ненадежден в този момент, няма смисъл да се извършва.
3. Мутациите на микобактериите водят до неефективна PCR - нормална последователност на ДНК не може да бъде синтезирана.
4. Необходимо е да се избере подходящата среда за изследването, кръв се взима само ако се подозира, че е заразена (сепсис), няма нужда да се приема храчка, ако има въпрос за туберкулоза на органите на нервната система. В този случай PCR няма да може да открие патогена и диагнозата ще бъде неинформативна.

Показания за откриване на туберкулоза чрез PCR анализ

PCR диагностицирането на туберкулоза се извършва най-често при спорни случаи. Кога лекарите правят това изследване?

1. Ако е трудно да се направи диагноза по обичайните налични методи, но има контакт с пациент с туберкулоза.
2. В случай, че човек не може да бъде предаден в клиника, за да премине рутинни рутинни тестове за туберкулоза, е по-лесно да го изследва с помощта на PCR, тъй като храчките за теста могат да бъдат доставени в бурканче и диагнозата се потвърждава в рамките на няколко часа.
3. Ако човек има спешна операция и спешно трябва да разбере дали е болен от туберкулоза.
4. Ако е необходимо, по-добре е бременната жена да се изследва за туберкулоза, използвайки PCR, тъй като методът е безопасен.
5. На платена основа всеки, който не е бил диагностициран с туберкулоза, е бил потвърден с бактериологични методи и флуороскопия. Това се случва, когато лезията в белите дробове е незабележима в директния образ, а човекът по време на раждането на храчки за изследването не може да следва препоръките за правилно събиране на материала. В този случай, човек е притеснен за всички симптоми, характерни за белодробна туберкулоза.
6. Когато има съмнения относно резултатите от теста Манту.
7. За предпочитане е да се направи PCR диагностика на туберкулоза при деца. Процедурата е безопасна, не създава допълнителна радиационна експозиция и е ефективна при откриване на трудни за диагностициране форми на заболяването.

Навременното диагностициране на туберкулозата е ключът към правилно предписаното лечение и намаляването на разпространението на болестта. Често познатите методи за откриване на заболявания не винаги са ефективни. Следователно, PCR днес е един от най-надеждните и безопасни начини за откриване на инфекция в ранните етапи на неговото развитие.

PCR анализ

PCR (полимеразна верижна реакция) е най-бързият и най-надежден метод за диагностициране на инфекциозни заболявания.

Принципът на метода на полимеразната верижна реакция е разработен от Кари Мулис през 1983 г. За своето откритие, К. Мулис през 1993 г. получава Нобелова награда по химия.

Методът PCR позволява да се постигне значително увеличение на малки концентрации на някои фрагменти от нуклеинови киселини (ДНК) в биологичния материал (проба). Методът се основава на многократно селективно копиране (амплификация) на определена секция от ДНК с използване на ензими при изкуствени условия.

Предимства на PCR диагностичния метод като диагностичен метод за инфекциозни заболявания

Директно откриване на патогени

Много традиционни диагностични методи, като ензимен имунологичен анализ, откриват белтъчни маркери, които са продукти на жизнената активност на инфекциозните агенти, което дава само непряко доказателство за наличието на инфекция. Идентифицирането на специфичен ДНК участък на патоген чрез PCR метода дава пряка индикация за наличието на патогена.

Висока специфичност

Високата специфичност на PCR метода се дължи на факта, че в изследвания материал е открит уникален ДНК фрагмент. Специфичността се определя от нуклеотидната последователност на праймерите, която изключва възможността за получаване на фалшиви резултати, за разлика от имунологичните методи за анализ, където грешките във връзка с кръстосано реагиращи антигени са чести.

Висока чувствителност

PCR методът позволява да се открият дори единични клетки от бактерии или вируси. PCR анализът показва наличието на патогени на инфекциозни заболявания в случаите, когато други методи (имунологични, бактериологични, микроскопични) не могат да направят това. Чувствителността на PCR анализа е 10-100 клетки на проба (чувствителността на имунологичните и микроскопските тестове е 103-105 клетки).

Универсалност на процедурата за откриване на различни патогени

Материалът за изследване чрез PCR е ДНК на патогена. Методът се основава на откриването на ДНК фрагмент или РНК, който е специфичен за определен организъм. Приликата на химичния състав на всички нуклеинови киселини позволява използването на унифицирани методи за лабораторни изследвания. Това дава възможност за диагностициране на няколко патогени от един биоанализ.

Висока степен на резултат от анализа

За PCR анализ не се изисква изолиране и култивиране на културата на патогена, което отнема много време. Единният метод за обработка на биоматериала и откриването на реакционни продукти и автоматизацията на процеса на амплификация позволяват да се извърши пълен анализ за 4-5 часа.

Способност за диагностициране не само на остри, но и на латентни инфекции

Методът PCR е особено ефективен за диагностициране на трудно култивирани, некултивирани и устойчиви форми на микроорганизми, които често се срещат при латентни и хронични инфекции, тъй като този метод избягва трудностите, свързани с отглеждането на такива микроорганизми в лабораторията. Използването на PCR диагностика също е много ефективно срещу патогени с висока антигенна вариабилност и вътреклетъчни паразити.

Колко ефективно е изследването на храчките за туберкулоза чрез PCR?

За да се идентифицират коковите пръчки при хора, се използват различни диагностични методи. Благодарение на него патологията може да бъде открита дори в началния етап, което увеличава шансовете на пациента за възстановяване. Анализът на храчките при туберкулоза е техника, която е най-ценена и доста ефективна. Какво е това и колко струва такъв анализ?

Какъв е анализът на храчките чрез PCR?

PCR означава полимеразна верижна реакция. Този метод е ефективен срещу инфекциозни заболявания. За да се установи ясна диагноза, не е необходимо да събирате голямо количество биоматериал и да чакате дълго време, както при сеитбата на храчки.

Методът се основава на получаване на ДНК на частици от микроорганизми. Освен това, молекулярно-генетичните изследвания ще определят какъв тип микроорганизми трябва да включват наличния материал. При условия на епруветка специалистът ще синтезира бактериални молекули и ще направи съответните заключения след няколко часа.

ефикасност

Анализът на храчките за Mycobacterium tuberculosis е ефективен, когато пръчката на Кох е ударила дихателната система. В този случай болестта може лесно да бъде идентифицирана дори в първите часове на инфекцията.

Но анализът на храчки няма да покаже надежден резултат, ако има туберкулоза:

• кости;
• мозък, гръбначен мозък;
• нервна система;
• фуги и др.

Фтизиатрият ще може да определи вида на заболяването, като вземе предвид настоящите симптоми и ще разчита на резултатите от общите и други анализи.

Също така е неподходящо за такъв метод на изследване в случая, когато трябва да се извърши контролен анализ след терапевтичното лечение на заболяването. Резултатът ще бъде положителен, тъй като в организма, във всеки случай, все още има живи или мъртви IBC. По-добре е да се даде предпочитание на друга диагностична процедура.

Противопоказания към метода

Като такива, няма противопоказания за изследване на храчки при туберкулоза с помощта на PCR. Има ограничения. Както бе споменато по-горе, няма нужда да се провежда след лечение на туберкулоза. Резултатите няма да бъдат полезни. Тук е желателно да се прибегне до различна диагноза.

Освен това няма други пречки за тази диагноза. Слюнката може да се изследва във всяка възрастова категория и при всякакви свързани заболявания. Дори ако няма изобилие от храчки, анализът може да се направи, като се вземе слуз, използвайки бронхоскопия.

предимства

При този метод масата на плюсовете включва:

1. Висока специфичност и чувствителност. Открива се само причинител на туберкулоза. Не може да има фалшив отговор, ако се вземат предвид всички нюанси на процедурата. Микобактериите се откриват дори при минимален брой. Дори ако в събрания материал има 10 анормални клетки, инфекцията ще бъде открита.
2. Скоростта на получаване на отговор. Колко анализ се прави? След 3-5 часа можете да получите резултат. Няма нужда да се прави култура на храчки за туберкулоза и това намалява времето.
3. Можете да идентифицирате като скрита инфекция и тази, която е в остра форма.
4. Няма абсолютни противопоказания. Това дава възможност за провеждане на процедурата за всички без изключение (дори и за малки деца) и особено когато не са решени други методи.
5. С помощта на PCR диагностика се изследват различни биоматериали (урина, фекалии, кръв, слюнка, гръбначно-мозъчна течност и др.).
6. Методът показва туберкулоза в ранните стадии, в първите часове след заразяването.

към съдържанието

недостатъци

Освен положителните страни има и отрицателни. Това е:

1. PCR анализът е скъпо „удоволствие“. В допълнение, оборудването, необходимо за неговото прилагане, не се предлага във всеки медицински център. В клиниките рядко присъства, тъй като стойността му също е голяма. Ако говорим за частни клиники, тогава да, можете да намерите този вид диагноза. Позволете си, за съжаление, не може всеки.
2. Той показва фалшиво положителен резултат при тези хора, които наскоро са преминали курс на лечение на туберкулоза.
3. Ако МВС е мутирал, методът може също да даде неверни резултати.
4. Ако материалът е събран неправилно, или специалистът, който провежда изследването, има недостатъчно квалификационно ниво, тогава е възможна и неизправност. В някои случаи процедурата трябва да се повтори няколко пъти и всеки път, когато плащането се повтаря.

към съдържанието

Подготовка за анализ

За да бъде материалът висококачествен, той трябва да бъде сглобен правилно и да бъде подготвен за него правилно.

Има определени правила за събиране на храчки за туберкулоза. Алгоритъмът за действие е както следва:

1. Дори в навечерието на вечерта човек трябва да пие отхрачващо средство (ако слюнката се отдалечава лошо). Дори и да не помогне, вдишването трябва да се извърши на базата на лекарствено средство за разреждане и отхрачване. При липса на храчки, пациентът е насочен към бронхоскопия. Именно по време на тази процедура се взема материалът за изследването.
2. Закупете специален контейнер предварително. Той е стерилен и херметичен, така че нищо допълнително не може да се постави там, както и да се отвори предварително.
3. Стаята, където ще се събира храчка, трябва да бъде добре проветрена. Необходимо е да отворите прозорците, вратите, да включите качулката. Друг добър вариант е да получите чист въздух (например към балкона или към двора).
4. Непосредствено преди процедурата трябва да предупредите всички, така че никой да не влезе в стаята, където всичко ще се случи. В биоматериала не трябва да има допълнителни микрочастици - това е важно.
5. Не се препоръчва хранене преди бране.
6. Изплакнете устата и гърлото.
7. Слюнката се изплюва. Неговият капацитет трябва да спадне минимално.
8. Чрез кашлица човек изважда храчките и го изплюва в подготвен контейнер. След процедурата затворете плътно капака и вземете пробата в лабораторията.

Как да събирате храчка трябва да кажете на лекаря. Ако пациентът не се осмели да го направи сам, здравни работници идват на помощ. По време на манипулацията те поставят специална защитна маска. Съберете храчка ще бъде в специална стая, където няма начин за непознати. Ако пациентът не може да дойде в клиниката, специалистът идва в дома му и помага за събирането на слуз.

Ако се направи бронхоскопия, пациентът се инжектира в трахеята с устройство - бронхоскоп. С негова помощ материалът се взема.

За надеждност е препоръчително анализът да се предава три пъти, а именно:

• сутрин на празен стомах;
• след първия път след 4-5 часа;
• 24 часа след първото изследване и също преди хранене.

към съдържанието

Как се прави този анализ?

Преминаването на тест за храчки за туберкулоза е само част от работата. Главно напред. Много зависи от това как е подготвен специалист.

Курсът на изследването е както следва:

1. Специалистът продължава с унищожаването на първичната структура на ДНК (денатурация). Тук има две вериги. При високи температури те се разделят.
2. На следващия етап температурата се намалява (закалява). Това е необходимо за свързването на ДНК веригата с праймера.
3. Третият етап е удължение. Тук се синтезират необходимите молекули.

към съдържанието

Резултати от декодирането

Mycobacterium tuberculosis в храчките чрез PCR може да се открие или не. Положителният резултат се основава на факта, че в биоматериала има ДНК на коковите пръчки. Това предполага, че човекът е заразен. С отрицателен - 98% от факта, че субектът не е заразен.

Индикаторите могат да се оценяват по:

• коя фаза на патология (латентна или активна);
• колко е засегнато тялото;
• дали избраното лечение е ефективно в даден случай.

Имайте предвид, че нищо не е задълбочено. Следователно може да има фалшиво-положителен или фалшиво-отрицателен резултат. За да се гарантира неговата коректност, се препоръчват други диагностични процедури или PCR се извършва два пъти (три пъти).

Анализ на разходите в различни центрове

Можете да дадете храчки за PCR в различни клиники. Нека дадем примери на няколко популярни московски центрове с ценова политика.

Анализ на PCR за храчки за туберкулоза

Mycobacterium tuberculosis (туберкулоза), ДНК (PCR), високо качество, храчки

Не се изисква специално проучване.

Тестов материал: Слюнка

Туберкулозата (от латински tuberculum - "tubercle") е специфично инфекциозно заболяване на хората и животните, което се предава главно от въздушни капчици. Рискът от инфекция се увеличава поради намаляване на имунитета, причинен от ХИВ / СПИН, хронично бъбречно заболяване, диабет, бременност, стареене, трансплантация на органи и свързаните с тях имунни супресанти. Освен това, децата под 5 години след туберкулиновия тест и тези, които имат контакт с пациенти с туберкулоза, са по-податливи на заболяването. Най-уязвимите групи са бездомните, затворниците, наркоманите и възрастните хора.

Туберкулозата при хора и животни причинява няколко близки вида микобактерии. Най-честият причинител на туберкулоза при хората е видът Mycobacterium tuberculosis.

След идентифициране на причинителя на туберкулоза е необходимо да се проведе проучване за чувствителността на микобактериите, открити при антитуберкулозни лекарства. Тази процедура е много важна за назначаването на адекватно лечение на заболяването.

Този анализ позволява да се определи наличието на генетичния материал (ДНК) на микобактерията туберкулоза в храчките. Анализът помага при диагностицирането на белодробна туберкулоза.

PCR методът е полимеразна верижна реакция, която позволява да се идентифицира наличието на генетичния материал в биологичния материал.
Повече информация за метода на PCR - неговите разновидности, предимства и приложения в медицинската диагностика.

Референтни стойности - Норма
(Mycobacterium tuberculosis (туберкулоза), ДНК (PCR), качествена, храчка)

Информация за референтните стойности на показателите, както и за състава на включените в анализа показатели може да се различава в зависимост от лабораторията!

Обикновено, ДНК на микобактерията туберкулоза отсъства в храчките.

№ 341MK, Mycobacterium tuberculosis, определяне на ДНК (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в храчки, промивки, промивки

Определяне на ДНК на патогени на туберкулоза: комплекс Mycobacterium: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в храчки, промивки от бронхите, промивна течност по метода на полимеразна верижна реакция (PCR) с откриване в "реален" режим време.

Туберкулоза (от латински. Tuberculum - tubercle) - обща, социално зависима болест на човека. Те са болни и животни. Причинителят на туберкулоза е открит от R. Koch през 1882 г. Това са кисело-устойчиви аеробни бактерии (74 вида) от вида mycobacterium, широко разпространени в почвата, водата и животните. При хората най-често срещаният патоген е Mycobacterium tuberculosis. Вторият най-често срещан е Mycobacterium bovis. И двата вида са много устойчиви на много фактори на околната среда и остават жизнеспособни в тялото за много дълго време и могат да причинят заболяване много години след заразяването. Много е важно микобактерията туберкулоза да образува така наречените L-форми. Трайни в организма, те създават имунитет на туберкулоза. Дълго време туберкулозата може да се появи латентно и може да бъде открита случайно, въпреки че често се проявяват симптоми като слабост, умора, ниска температура, нощни изпотявания, анемия и левкопения.

В момента, въпреки всички постижения на антимикробната терапия, туберкулозата застрашава бъдещето на нацията. Следователно всички диагностични методи, особено неговите латентни форми, са изключително важни.

Има много методи за лабораторна диагностика на туберкулоза: микроскопия на намазка (най-често използвана за тази цел слюнка), класически метод на култура, ELISA. Всички те имат предимства, но също така и някои недостатъци, по-специално откриването на микобактерии само в случай на достатъчен брой от тях.

През последните години за диагностициране се използва полимеразна верижна реакция (PCR). Неговата висока чувствителност позволява откриването на отделни клетки и дори фрагменти от ДНК в изследвания материал. Методът елиминира кръстосаните реакции и специфичността достига 100%. PCR позволява диференциране на ограничени и дисеминирани форми на туберкулоза, особено при деца, дори и при отрицателни резултати от микробиологични изследвания.

Аналитични показатели:

• откриваеми фрагменти - специфични участъци от микобактериална ДНК;
• специфичност на определяне - 100%;
• чувствителност на откриване - 100 копия на микобактериална ДНК в пробата.

• Бронхит, бронхопневмония, съпроводена с рязко увеличаване на базалните лимфни възли.
• Хемоптиза на фона на често астенично състояние.
• Остро възпаление на горните и долните дихателни пътища, придружено от продуктивна кашлица при продължителен контакт с пациент с туберкулоза в историята

Интерпретацията на резултатите от изследването съдържа информация за лекуващия лекар и не е диагноза. Информацията в този раздел не може да се използва за самодиагностика и самолечение. Точната диагноза се прави от лекаря, като се използват както резултатите от това изследване, така и необходимата информация от други източници: анамнеза, резултати от други изследвания и др.

Качество на теста. Резултатът е даден като „детектиран“ или „не е открит“.

"Открити": Специфични за микобактериите ДНК фрагменти, специфични за микобактериите, са открити в пробата за анализ.

„Не се открива“: в анализираната проба, специфични за микобактериите ДНК фрагменти или концентрацията на патогена в пробата не са намерени под границата на чувствителността на теста.

Обърнете внимание, че времето за провеждане на PCR проучвания може да бъде увеличено при провеждане на потвърдителни тестове.

1. Макаревич А.Е. Респираторни заболявания - М. Висше училище, 2000. - 368 с.
2. Jacobs D. et al. Наръчник за лабораторни изследвания / Lexi-Comp. 828 - 829.

• Обща информация

* Посоченият период не включва деня на вземане на биоматериала

Слюнка, тампони, промивна течност

PCR откриване в реално време.

В този раздел можете да разберете колко струва завършването на това проучване във вашия град, вижте описанието на теста и таблицата за тълкуване на резултатите. Избирайки къде да премине анализ на „Mycobacterium tuberculosis, ДНК определяне (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в храчки, промивки, промиване на течности” в Москва и други градове на Русия, не забравяйте, че цената на анализа, разходите за вземане на биоматериал, методи и време на изследване в Регионалните медицински служби могат да варират.

Методи за изследване на храчки при туберкулоза

Анализът на храчките за туберкулоза е включен в набор от диагностични мерки, необходими за идентифициране и изясняване на диагнозата. Съдържанието на слюнка ще помогне да се направи компетентен режим на лечение.

Как да преминат тест за храчки за туберкулоза

Лекарите са разработили правила за извършване на анализа. Слюнката се събира сутрин, преди човек да закусва. Първо, пациентът извършва хигиенни процедури:

• почистване на зъбния емайл;
• внимателно изплакване с чиста вода на устната кухина и фаринкса.

След това започва незабавното доставяне на материал за анализ. Как да преминат тест за храчки? Изисквания за процедурата:

1. Подготовката започва предварително, вечер. Пациентът се насърчава да приема специални лекарства, които ще направят белодробната секреция по-естествена. Това са отхрачващи и изтъняващи съединения. Ако такива процедури не помогнат, инхалирайте с фармацевтичен състав за отхрачване.
2. Подгответе контейнери за храчки. Слузта трябва да се събира в стерилизирани съдове, плътно и плътно да се затваря.
3. Преди раждането кашляйте и плюйте в контейнер. Обемът на слюнката не трябва да бъде голям, той изисква слюнка от ларинкса. Бактериите в устната кухина са външни при анализа.
4. Събирайте слюнка в стая с отлична вентилация. Анализът се извършва чрез отваряне на кърмата, задействане на качулката. Препоръчително е да отворите прозорците или да излезете на чист въздух.

По време на процедурата в стаята е забранено да влизат. Аутсайдерите могат да допринесат за микрофлората на офиса, а оттам и за храчките, патологичните образувания. Медицинските работници получават анализ в специална маска (респиратор).

Анализ на слюнка за транскрипт на туберкулоза

Декодирането започва с разглеждане на външния вид на слузта. Патологията характеризира промяната в цвета - става тъмна, с видими примеси на кръвта. Цветът не е основният индикатор. Слюнката става тъмна от пиенето на червено вино, страст от кафе. Някои лекарства и цветни напитки променят външния вид на слуз.

Събраният материал се дешифрира по два показателя, т.е. лекарите получават два резултата:

Положителен отговор

Анализът на получената слюнка потвърждава наличието на болестта в организма. Което потвърждава това:

• чужди тела или неизвестни включвания;
• наличието на съсиреци на слуз;
• видими ивици;
• неприятна гнойна или инфекциозна миризма;
• гной.

Макроскопски метод на изследване дава други данни:

• фибринозни конволюции;
• Кох памучни форми за леща;
• продукти от разпадане на бактериални вещества;
• остатъци от патологичния процес в белодробната тъкан.

Положителният резултат показва увеличено количество протеинови съединения. Достига до 100-120 г / л.

Друг микроскопичен метод позволява да се идентифицират други опасни елементи:

• алвеоларни макрофаги;
• надценен състав на левкоцити;
• високо ниво на лимфоцити.

За туберкулоза човек често се опитва да плюе от устата си. Hemoptysis увеличава образуването на червени кръвни клетки. Обемът на слюнката в устата е такъв, че човек не може да го погълне, без да забележи. Нейната повече, отколкото в здравословно състояние.

Отрицателен отговор

Проучването показва, че броят на левкоцитите е малък, съответства на нормата. Микробактериите също не са открити. Ако пациентът не се чувства здрав, тогава специалистът ще предпише допълнително изследване. Възможно е заболяването да е свързано с белодробна болест. Видовете и методите на допълнителна диагностика зависят от симптомите и състоянието на пациента.

Как е изследването на слуз

Туберкулозата е опасен патологичен ефект върху белодробната тъкан, наблюдава се тяхното разпадане. Анализът се извършва по няколко метода. Най-често срещаният - ELISA (имуноанализ). Същността на метода:

1. Към разтвора, в който е поставена част от храчките, се добавят антитела.
2. Проверете концентрацията на антигени в сравнение с нормата за здраво тяло.
3. Определете активността на патологичната среда.
4. С диагноза.

Втората версия на лабораторните изследвания е ОТПАДЪЦИ. За метода вземете специално медицинско оборудване. Същността на хардуерното изследване:

1. В слюнката се инжектира микросреда за предвидения тип инфекция.
2. Апаратът започва да расте при определена температура бактерии.
3. В процеса се произвежда въглероден диоксид и сензорите го вземат.
4. Газът се комбинира с боята.
5. На индекса на флуоресценция направете изводи за вида на заболяването.

Най-лесният начин е културният. Флегма, засята в специална среда. Лекарят изследва видовете колонии от микробни образувания. Методът е най-дълъг, но ви позволява да докажете диагнозата. Използва се много рядко, именно поради дълъг период от време, който не винаги е подходящ за пациента.

Анализ на храчки за туберкулоза

PCR е съкращение от медицинската терминална полимеразна верижна реакция. Диагностиката е едно от най-новите разработки на учените. Той е открит през 1983 г., значението на откритието е оценено в света, ученият получи най-високото признание - Нобеловата награда.

Методът се основава на използването на генно инженерство. Неговата гъвкавост в нуждата от малко количество материал за точна диагноза. Идентифициране на инфекция с туберкулоза е наистина в ранните часове на инфекцията, без да се чака развитието на болестта.

Същността на метода, който е полимераза:

• пациентът взема фрагмент от ДНК частици;
• провеждане на биологичен синтез на материала;
• определя се от класа на микроорганизмите.

Процесът е технологично сложен, включва молекулярно-генетично изследване. PCR за туберкулоза отнема буквално няколко часа. Времето, необходимо за други методи, не може да се сравни с него по скорост. След като е преминал анализа, пациентът чака откриването на причинителя. Процесът, който е в основата само на един специалист, може да разбере. Един обикновен човек не разбира тънкостите на метода.

Как се диагностицира туберкулозната проба:

1. Вземете необходимия материал за анализ. Какво би могло да бъде това: кръв, стомах, храчки, вода, измити с бронхи.
2. Видът на материала се избира в зависимост от вида на патогенната инфекция.
3. Следващата стъпка е да се проучи верижната връзка. Две вериги са подложени на високи температури до 98 градуса. Етапът се нарича денатурация (разрушаване на структурната ДНК верига). Време за експозиция на температурата - до 2 минути.
4. Следващият етап е отгряване. Температурата се намалява, праймерът се оставя да се свърже с ДНК веригата.
5. В резултат на това се наблюдава удължаване - синтеза на молекули, необходими за процеса.

За такъв анализ е необходимо специално оборудване. Това е скъпо, така че не е налично в нито едно здравно заведение. PCR се извършва в трудни случаи, когато няма точен резултат от конвенционалните диагностични методи, не е възможно да се проведат инструментални методи за проверка на състоянието на пациента.

Предимствата на PCR технологията:

1. Скоростта на получаване на резултата. Приблизително 5 часа лекар има точни данни. Тази скорост ви позволява да помогнете на пациента в спешен случай. По-често това е предоперативният период.
2. Разрешено е, когато не могат да се използват други методи. Например, честото повторение на рентгеновите лъчи води до радиация. PCR не е опасна за пациента.
3. Можете да изследвате всяка биологична среда. Идентифицират се дори сложни форми на туберкулоза.
4. Следователно методът е безопасен и подходящ за деца.
5. Инфекцията се открива на всеки етап.
6. PCR не позволява да се скрие дори малък брой бактериални микроформи.
7. Подходящ за проверка на възможния рецидив на туберкулоза.

Колко струва анализ на храчки при туберкулоза

Пробите се вземат повече от веднъж. Повторенията изключват възможността за грешки или получаване на материал с ниско качество, който не отразява истинското положение и състояние на пациента. Колко пъти за събиране на храчки, кажете на лекуващия лекар. Най-добрият вариант е три пъти на ден. Понякога може да са необходими допълнителни проби. През какви периоди от време събират:

1. Преди ядене сутрин.
2. 3-4 часа след първия тест.
3. На втория ден, също преди хранене.

Туберкулозата е опасна болест, която може да засегне организма на всяко лице. Има много ситуации на инфекция. При всяко подозрение за възможността от инфекция, не чакайте ярки симптоми. Тя трябва да бъде тествана, изследвана и навреме, за да започне лечението.

PCR диагностика на туберкулоза

Туберкулозата е специфична инфекция, фокусът му може да бъде в човешките тъкани в продължение на години и след това да се разпространи в продължение на няколко месеца. Това е хронично заболяване, чиито оптимални схеми на лечение са трудни за избор. Една от причините за това е късната диагноза, когато микобактериите, докато са в човешкото тяло, вече са се адаптирали към много лекарства.

Какви съвременни методи за диагностика съществуват? PCR диагностика - какво е това? Как се извършват тези изследвания? В какви случаи е диагностицирана туберкулоза по този метод и каква е неговата същност?

Какво е PCR диагностика

Това е един от най-модерните методи за диагностициране не само на болестите, но и на откриването на биологичен материал. PCR диагностиката е изобретена сравнително наскоро. Преди около 30 години през 1983 г. американски биохимик, Кари Банкс Мълис, предложи комплексна схема за възстановяване на биологичния материал от микроорганизми в един кратък сегмент. Благодарение на откритието си, ученият е награден с най-високата награда - Нобелова награда.

Какво е това - PCR диагностика на инфекции? Полимеразната верижна реакция (PCR) е диагноза за откриване на вирусни заболявания, базирана на методите на генното инженерство. Широко се използва в медицинската микробиология, имунология и вирусология. Методът е универсален и помага да се постави диагноза с малко количество материал. Инфекцията може да бъде открита буквално в първите часове на заразяване с нея, много преди появата на първите симптоми на заболяването.

Методът се състои в получаване от материала на болен човек не на самия патоген, а на фрагменти от генома (ДНК частици), неговата биосинтеза с последващо определяне към кой клас микроорганизми е получен генетичният материал чрез молекулярно-генетични методи.

Въпреки факта, че това е сложен процес, отнема много по-малко време от много биологични методи за откриване на инфекциозни агенти. Само за няколко часа може да се открие микроорганизъм чрез PCR. За да направите това, няма нужда да го изолирате от околната среда (кръв, гръбначно-мозъчна течност, храчка) и да го отглеждате дълго време върху изкуствени хранителни среди. Достатъчно е, че малък фрагмент от ДНК веригата на инфекциозния агент присъства в изследвания материал.

В основата на реакцията е възможността при изкуствени условия (in vitro) да се създаде синтез на молекули на нуклеинова киселина на инфекциозния агент.

Какво е необходимо за PCR?

1. Праймерите са ДНК сегментите, от които започва биосинтезата или създаването.
2. Нуклеотиди или комплексни съединения, които са в основата на ДНК или РНК молекула.
3. Полимеразната верижна реакция е невъзможна без наличието на полимераза, която е ензим, ускоряващ PCR.

Етапи на PCR диагностика

Как се осъществява молекулярната диагностика чрез PCR? Процедурата е проста и отнема кратко време, като се взема предвид събирането на материала.

1. Преди започване на изследването, те вземат необходимия биологичен материал - това е бронхиалната промивна вода, кръвта, стомашното съдържание, храчките. Видът на биологичния материал зависи от предполагаемия патоген.
2. Денатурация или унищожаване на първичната структура на ДНК, която се състои от две вериги. Същността на този етап е да се разделят двете вериги под въздействието на висока температура (максимумът е 98 ° C, който продължава не повече от две минути).
3. На следващия етап на PCR, наречен отгряване, температурата се намалява с няколко градуса, така че праймерът ще се свърже с ДНК веригата.
4. Удължение, по време на което директно се осъществява синтеза на желаните молекули.

В резултат на това само 25-30 такива цикъла получават необходимия брой копия на ДНК на микроорганизма, които лесно се разпознават.

Дали PCR изисква диагностициране на туберкулоза?

Не е възможно абсолютно всички хора със съмнение за туберкулоза да извършват PCR, тъй като методът изисква скъпо оборудване. Не всички публични клиники могат да си позволят да я купят. Освен това се случи така, че обичайните методи за диагностициране на инфекция в повечето случаи също се оправдават.

Те включват:

• изследване на пациента, вземане на история;
• пълен преглед на лицето;
• изследване, използващо Mantoux туберкулинов тест;
• радиография или флуорография;
• компютърна диагностика, ако е необходимо;
• микробиологични методи за изследване: микроскопия на намазка и бактериологично изследване на храчка.

PCR за туберкулоза се извършва в специални случаи, когато е трудно да се постави диагноза или не е възможно да се извършат други инструментални методи.

Въпреки изобилието от диагностични методи, честотата на туберкулозата продължава да нараства. В момента има не само растеж, но и други характеристики:

• заболяването често се среща в тежка форма;
• увеличава се броят на фаталните случаи;
• все по-устойчиви на съвременна химиотерапия са диагностицирани форми на заболяването.

Нежеланието на самите хора да се подлагат на рутинни медицински прегледи годишно, отхвърлянето на ваксинацията води до разпространение на туберкулоза. В такива условия са ни необходими бързи, информативни и ефективни изследователски методи, които трябва да бъдат достъпни за деца и възрастни. Всички горепосочени диагностични методи са много по-ниски от PCR.

Ползи от диагностицирането на туберкулоза с PCR

Това изследване, макар и ново, се е доказало добре, особено в спорни случаи, когато е невъзможно да се постави диагноза по редица причини.

Благодарение на PCR е много по-лесно да се открие причинител на туберкулоза в тестовия материал.

Предимствата на PCR диагностиката са следните.

1. Това е бърз анализ. Малък фрагмент от ДНК молекулата може да бъде използван за диагностика само за няколко часа (около пет), който успешно се използва в извънредни ситуации, когато, например, преди операция е необходимо да се определи дали човек е болен от туберкулоза.
2. PCR анализът е позволен в случаите, когато други методи са недостъпни или забранени (за откриване на белодробна туберкулоза, понякога трябва да вземете няколко рентгенографски изображения, които ще бъдат голяма доза радиация).
3. С помощта на PCR, всяка биологична среда се изследва за наличие на патоген в нея. Например, можете да провеждате изследване на гръбначно-мозъчната течност, ако има съмнение за туберкулозен менингит.
4. Позволена PCR диагностика на инфекциозни заболявания при деца, тъй като методът е безопасен.
5. Позволява ви да идентифицирате патогена на всеки етап от заболяването.
6. Високата чувствителност на PCR дава възможност за откриване на Mycobacterium tuberculosis, дори ако в биологичния материал има само няколко микроорганизма.
7. Добре е да се направи диагноза за рецидив на заболяването.

След всички прочетени PCR изглежда почти перфектен диагностичен метод, който трябва да направи всеки с подозрение за туберкулоза. Но има и недостатъци тук, те трябва да бъдат взети под внимание.

Недостатъци на PCR при диагностицирането на туберкулоза

В наше време такава диагностика е по-рядка от редовността. И за това има причина.

1. Това е скъп изследователски метод. В много клиники оборудването за PCR липсва поради високата му цена, но анализът все още може да се направи в платени лаборатории.
2. Веднага след лечението, мъртвите микобактерии или живеещите в малки количества все още могат да присъстват в човешкото тяло (резултатът ще бъде положителен по време на PCR диагностика), така че методът ще бъде ненадежден в този момент, няма смисъл да се извършва.
3. Мутациите на микобактериите водят до неефективна PCR - нормална последователност на ДНК не може да бъде синтезирана.
4. Необходимо е да се избере подходящата среда за изследването, кръв се взима само ако се подозира, че е заразена (сепсис), няма нужда да се приема храчка, ако има въпрос за туберкулоза на органите на нервната система. В този случай PCR няма да може да открие патогена и диагнозата ще бъде неинформативна.

Показания за откриване на туберкулоза чрез PCR анализ

PCR диагностицирането на туберкулоза се извършва най-често при спорни случаи. Кога лекарите правят това изследване?

1. Ако е трудно да се направи диагноза по обичайните налични методи, но има контакт с пациент с туберкулоза.
2. В случай, че човек не може да бъде предаден в клиника, за да премине рутинни рутинни тестове за туберкулоза, е по-лесно да го изследва с помощта на PCR, тъй като храчките за теста могат да бъдат доставени в бурканче и диагнозата се потвърждава в рамките на няколко часа.
3. Ако човек има спешна операция и спешно трябва да разбере дали е болен от туберкулоза.
4. Ако е необходимо, по-добре е бременната жена да се изследва за туберкулоза, използвайки PCR, тъй като методът е безопасен.
5. На платена основа всеки, който не е бил диагностициран с туберкулоза, е бил потвърден с бактериологични методи и флуороскопия. Това се случва, когато лезията в белите дробове е незабележима в директния образ, а човекът по време на раждането на храчки за изследването не може да следва препоръките за правилно събиране на материала. В този случай, човек е притеснен за всички симптоми, характерни за белодробна туберкулоза.
6. Когато има съмнения относно резултатите от теста Манту.
7. За предпочитане е да се направи PCR диагностика на туберкулоза при деца. Процедурата е безопасна, не създава допълнителна радиационна експозиция и е ефективна при откриване на трудни за диагностициране форми на заболяването.

Навременното диагностициране на туберкулозата е ключът към правилно предписаното лечение и намаляването на разпространението на болестта. Често познатите методи за откриване на заболявания не винаги са ефективни. Следователно, PCR днес е един от най-надеждните и безопасни начини за откриване на инфекция в ранните етапи на неговото развитие.

Mycobacterium tuberculosis, ДНК [PCR в реално време]

Изследване за идентифициране на причинителя на туберкулоза (Mycobacterium tuberculosis), по време на което генетичният материал (ДНК) на микобактерията в проба от биоматериал се определя чрез метода на полимеразна верижна реакция в реално време (RT-PCR).

Руски синоними

Туберкулоза, Mycobacterium tuberculosis, пръчки Koch.

Английски синоними

Туберкулоза, туберкулозен бацил, бацила на Кох.

Изследователски метод

Реакционна верижна реакция в реално време.

Какъв биоматериал може да се използва за изследвания?

Венозна кръв, биопсия, маточни ендометриални клетки, гръбначно-мозъчна течност, урогенитална мазка (със секреция на простатата), слюнка, плеврална течност, първата част на утринната урина, еякулат.

Как да се подготвим за изследването?

Не се изисква обучение.

Обща информация за проучването

Туберкулоза (от латински. Tuberculum - "tubercle") - инфекциозно заболяване на хората и животните, предавано главно от въздушни капчици. Рискът от инфекция увеличава имуносупресията, причинена от ХИВ / СПИН, диабет, бъбречни заболявания, трансплантация на органи и използване на имуносупресори, бременност, стареене. В допълнение, тези, които са в контакт с пациенти с туберкулоза, както и деца под 5 години след туберкулиновия тест, са най-податливи на него. Най-уязвимите групи от населението включват бездомни хора, затворници, мигранти от страни с висока честота на туберкулоза, употребяващи наркотици и възрастни хора.

За това изследване се използва тест-система, базирана на откриването на геномна ДНК на причинителя на туберкулоза с използване на полимеразна верижна реакция в реално време (PCR) (PCR в реално време). В съвременната диагностика той е един от най-бързите, най-гъвкавите и високо чувствителни методи.

Стандартните методи за откриване на микобактерии туберкулоза се основават на култивирането на патогенни микроорганизми в хранителна среда. Трудности, свързани с ниския растеж на колониите на Mycobacterium tuberculosis - трябва да се очакват до 1.5 месеца след приемането на материала.

Молекулярно-биологичните методи, базирани на откриването на генетичния материал на микобактерията туберкулоза, имат висока чувствителност и специфичност. Най-важното им предимство е високата скорост на получаване на резултати. Използването на PCR в реално време ви позволява да идентифицирате причинителя на туберкулоза в деня на получаване на клиничната проба.

Бактеремия (микобактерия, постъпваща в кръвния поток на пациента) може да се появи в ранните стадии на туберкулозната инфекция, както и в развитието на генерализирана или извънбелодробна туберкулоза. Това е опасно, защото имунният отговор към бактериите ще предизвика сепсис и септичен шок, който е изпълнен със смърт. Рискът от развитие на генерализирана туберкулоза е най-висок при пациенти с ХИВ в по-късните етапи, сред тези, които са прекъснали антитуберкулозната терапия, както и сред тези, които не са потърсили медицинска помощ навреме за появата на симптоми на туберкулоза.

Диагностицирането на туберкулоза при ХИВ-инфектирани хора е трудно поради имуносупресираното състояние на тялото, което често се проявява в фалшиво-отрицателни резултати от туберкулинови реакции и микробиологични тестове. В тази връзка, тестването за Mycobacterium tuberculosis чрез PCR в реално време е от голямо значение.

За какво се използват изследванията?

• За диагностициране на белодробна туберкулоза (в частност, нейната генерализирана и извънлегочна, свързана с бактериемия, форми) и наблюдение на лечението.

Кога е планирано проучването?

• При съмнение за извънбелодробна туберкулоза.
• С симптоми на бактериемия на фона на туберкулозна инфекция: повишена телесна температура, изпотяване и др. (С малък брой бактерии в кръвта, бактериемията може да бъде асимптоматична).
• Ако пациентът е имал продължителен контакт с пациент с туберкулоза.
• При анормална реакция на туберкулиновия тест при деца.
• Когато пациентът има HIV инфекция.

Какво означават резултатите?

Референтни стойности: отрицателни.

• Наличието на патоген в изследвания биоматериал. Обикновено се проявява при активна туберкулоза, изискваща лечение. Идентифицирането на голям брой микобактерии често показва екстрапулмонална форма на туберкулоза или генерализация на инфекцията.

• Не е открит причинител на туберкулоза. Бактеремията липсва.

Какво може да повлияе на резултата?

Ефективната антитуберкулозна терапия с течение на времето води до изчезването на микобактериите в клиничния материал.

Важни бележки

За да се предпише правилен режим на лечение, когато пациентът е диагностициран с туберкулоза, е необходимо да се проведе тест за чувствителността на микобактериите към противотуберкулозните лекарства.

Също така се препоръчва

Кой прави проучването?

Общопрактикуващ лекар, терапевт, фтизиолог, уролог, гинеколог, специалист по инфекциозни заболявания.